【摘 要】
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纤维二糖水解酶II (CBH II)是纤维素酶的重要组分之一，对纤维素酶的水解性能有着重大影响，而里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶制剂中纤维二糖水解酶II明显不足，为了优化其
【机 构】
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浙江大学生物质化工教育部重点实验室
【基金项目】
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浙江省重点科技创新团队资助项目;
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纤维二糖水解酶II (CBH II)是纤维素酶的重要组分之一，对纤维素酶的水解性能有着重大影响，而里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶制剂中纤维二糖水解酶II明显不足，为了优化其酶系结构，采用了基因重组技术构建CBH II 高产菌株：将里氏木霉 CBH II 基因置于里氏木霉强启动子 Pcbh1(及其信号肽)和终止子 Tcbh1之间，并进一步以pCAMBIA1300为载体骨架，构建成含潮霉素B抗性标记的重组质粒pCAMBIA1300-hph-PsCT。以里氏木霉ZU-02为宿主，采用根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒转入宿主分生孢子。以潮霉素B为抗性标记初筛到324个阳性转化子，进一步通过复筛，在以微晶纤维素为唯一碳源的筛选培养基上获得8个生长较快的优良转化子。在摇瓶条件下，分别对8个转化子进行产酶试验，培养48 h时，纤维二糖水解酶活力最高可达18.24 U?mL-1，是出发菌株的2.51倍。本结果对于里氏木霉纤维素酶的定向进化、提高其对纤维素的协同糖化效率具有重要意义。
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