【摘 要】
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为克隆绵羊角细胞关联蛋白2(Keratinocyte-associated protein 2,KRTCAP2)基因mRNA并分析该基因表达分布规律,本研究首先提取小尾寒羊与新吉细毛羊皮肤及不同组织总RNA,RT-PC
【机 构】
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吉林省农业科学院动物生物技术研究所,吉林公主岭136100;黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院,黑龙江齐齐哈尔161005
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为克隆绵羊角细胞关联蛋白2(Keratinocyte-associated protein 2,KRTCAP2)基因mRNA并分析该基因表达分布规律,本研究首先提取小尾寒羊与新吉细毛羊皮肤及不同组织总RNA,RT-PCR方法克隆KCTCAP2基因并进行两个品种间的比较分析,随后利用HRM方法对目的SNP位点进行基因多态性分析,最后用qRT-PCR方法分析两个品种不同组织间KRTCAP2基因的时空表达分布.RT-PCR扩增显示绵羊皮肤组织出现略小于500 bp的特异性条带,测序证实该片段为KRTCAP2基因,长度为466 bp,编码149个氨基酸.所克隆的4条片段中存在4个SNP位点,其中2个SNP位点引起氨基酸位点突变.针对c.194位A＞G突变位点设计的HRM检测发现小尾寒羊、新吉细毛羊等群体中并不存在该多态位点.小尾寒羊与新吉细毛羊不同组织间的表达分布显示,KRTCAP2基因存在多组织表达特性,在两品种羊组织表达模式既存在一致性也存在差异性.一致性主要表现为小尾寒羊与新吉细毛羊中肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠道与皮肤组织中KRT-CP2表达量较心脏组织呈现上调表达的趋势.差异性表现为新吉细毛羊在肝脏、脾脏、肺脏、肠道、脑和皮肤的组织表达量均高于小尾寒羊,在肌肉和卵巢组织中的表达量低于小尾寒羊,在肾脏组织中的表达量基本持平.本研究成功克隆出绵羊KRTCAP2基因并进行了系统分析,为探讨绵羊角细胞功能奠定了基础.
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