【摘 要】
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目的观察脂多糖(LPS)协同转化生长因子-β1(TGF-β1)作用于乳腺癌MCF-7细胞的生物学效应,并探讨其分子生物学机制。方法倒置显微镜下观察细胞形态;罗丹明-鬼笔环肽标记细胞骨架;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail、Twist以及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的基因表达水平;Trans
【机 构】
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430030武汉市中心医院检验科,430030武汉市中心医院检验科
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目的观察脂多糖(LPS)协同转化生长因子-β1(TGF-β1)作用于乳腺癌MCF-7细胞的生物学效应,并探讨其分子生物学机制。
方法倒置显微镜下观察细胞形态;罗丹明-鬼笔环肽标记细胞骨架;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail、Twist以及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的基因表达水平;Transwell小室检测迁移、侵袭能力;明胶酶谱检测活性蛋白MMP-9的表达水平;Western blot检测核因子(NF)-κB、细胞外信号调节激酶(ERK)和Smad信号通路。
结果LPS和TGF-β1联合组(联合刺激组)的细胞呈纺锤状,细胞骨架明显改变。联合刺激组E-cadherin显著下调,Vimentin、Snail-2、Twist、MMP-9 m RNA表达水平显著上调;对照组、LPS组、TGF-β1组、联合刺激组每个视野迁移细胞数分别为(6. 8± 4. 1)、(10. 2±4. 3)、(39. 5±3. 8)、(69. 7±4. 4)个,每个视野侵袭细胞数分别为(4. 4±1. 1)、(6. 8± 2. 4)、(32. 1±2. 3)、(54. 9±4. 5)个。联合刺激组活性MMP-9表达水平最高;联合刺激组磷酸化ERK和磷酸化Smad-2的水平要高于TGF-β1组。
结论LPS能够增强TGF-β1诱导乳腺癌MCF-7细胞发生上皮-间充质转化,并且两者联合作用能够促进MCF-7细胞发生侵袭迁移。
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