【摘 要】
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目的构建siRNA体内表达载体pSilence-2.1-U6-siRNA,筛选出抑制甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)2A表达的有效靶序列,为MAT2A的功能研究奠定了基础.方法以MAT2A为目的基因,以产生siRNA
【机 构】
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武汉大学中南医院普外科,武汉大学生命科学院现代医学病毒室
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目的构建siRNA体内表达载体pSilence-2.1-U6-siRNA,筛选出抑制甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)2A表达的有效靶序列,为MAT2A的功能研究奠定了基础.方法以MAT2A为目的基因,以产生siRNA质粒载体pSilence-2.1-U6为表达模板,细胞内转录合成4条siRNA,并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-MAT2A.脂质体转染法将重组质粒载体plucF-MAT2A与产生siRNA的质粒pSilence-2.1-U6共转染293T细胞,定量测量荧光素酶活性,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA,然后将有效的siRNA转染Bel-7402肝癌细胞,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MAT2A mRNA表达,并检测转染后肝癌细胞MAT的活性及细胞凋亡情况,进一步证实siRNA对MAT2A表达的抑制效果.结果所合成的4条小干扰RNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为81%和89%,并特异性抑制肝癌细胞MAT2A mRNA表达,降低了肝癌细胞中MAT活性,诱导肝癌细胞凋亡.结论 siRNA抑制肝癌细胞MAT2A基因表达.
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