【摘 要】
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目的 克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶 (ALT1)蛋白及制备抗血清 ,探讨建立ALT1特异性检测方法思路。方法 逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人ALT1cDNA ,插入pGEX 2T ,构
【机 构】
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南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科; 南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科 350025福州; 350025福州; 350025福州;
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目的 克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶 (ALT1)蛋白及制备抗血清 ,探讨建立ALT1特异性检测方法思路。方法 逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人ALT1cDNA ,插入pGEX 2T ,构建原核表达载体 pGEX 2T ALT1,并转入大肠杆菌进行表达。SDS PAGE ,活力测定和活性染色鉴定表达产物。表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1,重组ALT1及重组ALT2进行Westernblot分析。结果 重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX 2T载体。SDS PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性。抗ALT1血清除识别重组ALT1外 ,还可识别天然蛋白和重组ALT2。结论 重组人ALT1得到高效可溶性表达。用目前方法制备的抗血清特异性不高 ,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体 ,以避免交叉反应引起的假性升高。
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