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目的
构建小鼠Cbl-b基因RNA干扰（RNAi）的真核表达质粒，并初步鉴定其干扰效果，为后续研究Cbl-b在黑素瘤免疫治疗中的作用奠定基础。
方法根据基因库提供的Cbl-b cDNA序列，设计并合成4对短发夹结构的互补DNA序列，克隆至载体PGPU6/GFP/Neo构建重组质粒，并予以DNA测序鉴定。重组干扰质粒构建成功后，将干扰质粒与Cbl-b过表达载体共转染293T细胞，于转染后48 h，通过实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测各质粒对Cbl-b基因的表达抑制效应。
结果测序分析证实，4对shRNA寡核苷酸序列分别成功插入至shRNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo中，将构建成功的PGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒与Cbl-b真核表达载体共转染细胞48 h后，通过荧光实时定量PCR法及Western印迹测定，发现4条shRNA序列对Cbl-b的表达均有一定的抑制效应，其中以1号shRNA序列重组质粒对Cbl-b表达的抑制程度最高（P< 0.05）。
结论成功构建并筛选出沉默效应最高的Cbl-b shRNA真核细胞表达载体。