探索由人羊膜上皮细胞（hAEC）、成纤维细胞与去表皮的真皮（DED）构建组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损的可行性。

采用低浓度胰蛋白酶多步消化分离法提取hAEC，并用两步酶消化法处理健康小儿包皮，获得成纤维细胞悬液，传代培养。将体外扩增培养至第3~ 5代的成纤维细胞和第2代hAEC分别接种在DED真皮面和基底膜面，体外器官培养构建组织工程皮肤。取3~ 4周龄健康雄性裸鼠20只，抽签法随机分为2组，在所有小鼠背部正中制备全层皮肤缺损模型。组织工程组用构建的组织工程全层皮肤覆盖创面；对照组创面仅覆盖凡士林油纱。分别于术后第7、14、21、28天对裸鼠全身及移植部位大体观察，比较两组间创面愈合时间及创面愈合率，并对移植部位行组织学观察。

hAEC具有干细胞特征，免疫荧光显示其表达结合转录因子4（OCT-4）、阶段特异性胚胎抗原4（SSEA-4）。器官培养2周后，体外构建的组织工程皮肤形成4~ 9层复层表皮，且表皮的组织结构形态与正常皮肤类似。移植组织工程皮肤至裸鼠创面后肉眼观察显示，在移植后第7、14、21天，组织工程组创面愈合率分别为57.49% ± 6.11%、92.80% ± 3.10%、98.83% ± 0.25%，均明显高于对照组（22.93% ± 4.26%、54.57% ± 7.94%、91.16% ± 4.79%），差异均有统计学意义（n= 10，t值分别为27.36、32.23、11.80，均P < 0.001），组织工程组创面愈合时间[（21.51 ± 1.51）d]明显短于对照组[（28.80 ± 1.14）d]（n= 10，t= 42.23，P < 0.001），且在移植后第28天移植物颜色与自体皮肤颜色接近。组织学观察显示，组织工程组上皮层次清晰，角化明显，真皮层细胞生长良好；对照组移植区上皮较薄且有部分缺损，真皮层次欠佳，且可见炎症细胞浸润。

用hAEC、成纤维细胞复合DED构建的组织工程皮肤移植后能在裸鼠体内存活，且创面愈合更佳，可望成为一种较理想的组织工程皮肤。