目的 建立检测乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）逆转录酶区（RT）耐药位点的方法,并分析HBV cccDNA与松弛环状DNA（rcDNA）RT区耐药位点及耐药突变率的差异. 方法利用滚环扩增法（RCA）同时扩增20例慢性乙型肝炎患者肝组织中HBVcccDNA和HBV载量为108拷贝/ml血清中的rcDNA,再以该扩增产物为模板,以跨缺口引物扩增HBV cccDNA和HBV rcDNA RT区;巢式PCR直接扩增同一患者血清中HBV rcDNA RT区.HBV cccDNA和HBV rcDNA RT区扩增片段经测序后采用Vector NTI Suite8.0及chromaslite201分析其耐药突变位点;采用x2检验比较rcDNA和cccDNA RT区的耐药突变率. 结果以RCA产物为模板用跨缺口引物成功扩增并获得肝组织cccDNA RT区片段,阴性对照组及HBV载量为108拷贝/ml血清rcDNA组均无扩增产物;巢式PCR.直接扩增获得同一患者血清中HBV rcDNART区片段.序列测定结果显示,本组试验中10例有抗病毒史的慢性乙型肝炎患者发生rcDNA RT区耐药者有6例,突变率为60%,1例发生cccDNA RT区突变,突变率为10%,两者比较,P=0.019,差异有统计学意义.10例无抗病毒史的慢性乙型肝炎患者有2例发生rcDNA耐药,耐药突变率为20%,1例发生cccDNA耐药突变,突变率为10%,两者比较,P=0.531,差异无统计学意义.产生耐药突变的患者其cccDNA与rcDNA RT区耐药突变位点均不相同.结论 RCA可用于HBV cccDNA RT区耐药突变位点检测;有抗病毒史的患者的rcDNA与cccDNA RT区耐药突变不同步.在辅助临床治疗中,对HBV cccDNA进行耐药监测比对HBV rcDNA耐药监测更有意义。
乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA和松弛环状DNA耐药突变检测及比较
【摘 要】
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目的 建立检测乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）逆转录酶区（RT）耐药位点的方法,并分析HBV cccDNA与松弛环状DNA（rcDNA）RT区耐药位点及耐药突变率的差异. 方法利用滚环扩增法（RCA）同时扩增20例慢性乙型肝炎患者肝组织中HBVcccDNA和HBV载量为108拷贝/ml血清中的rcDNA,再以该扩增产物为模板,以跨缺口引物扩增HBV cccDNA和HBV r
【机 构】
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桂林医学院生物技术学院,广西,桂林医学院生物技术学院,广西,解放军第三O二医院,北京100039,解放军第三O二医院,北京100039,解放军第三O二医院,北京100039
【出 处】
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中华肝脏病杂志
【发表日期】
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2010年18期
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