【摘 要】
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目的 制备一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)假病毒,并将其应用于抗体中和能力检测和抗体广谱性评估.方法 整合2种近期出现的SARS-CoV-2变异病毒株(20A.EU1和B1.1.7)刺突(spike,S
【机 构】
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目的 制备一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)假病毒,并将其应用于抗体中和能力检测和抗体广谱性评估.方法 整合2种近期出现的SARS-CoV-2变异病毒株(20A.EU1和B1.1.7)刺突(spike,S)蛋白的突变序列、以及对胞浆区肽段19个氨基酸进行局部缺失突变,构建突变型S蛋白表达质粒,转染293T细胞进行表达,用Western blot和流式细胞术检测确认S蛋白的表达.将S蛋白表达质粒与其它慢病毒包装质粒共转染293T细胞进行假病毒的包装,用包装好的假病毒分别感染293T-hACE2细胞和Huh-7细胞,并进行假病毒的半数组织感染剂量(TCID50)检测.利用所制备的假病毒对1株抗S蛋白的单克隆抗体(YK-01)进行抗体的中和能力评价.结果 Western blot和流式细胞术检测结果显示野生型和突变型S蛋白在293T细胞中表达水平一致,突变型S蛋白在细胞膜表面的分布量略高于野生型.相同的病毒包装条件下,所获得的突变型假病毒感染293T-hACE2细胞的TCID50值为6.30×106,野生型假病毒的TCID50值为1.83×106.在Huh-7细胞中虽然能够观察到GFP阳性细胞,但GFP阳性细胞比例以及荧光强度均较低.对抗体的中和能力评价结果显示,从新冠肺炎的康复患者的血液筛选获得的YK-01抗体能够有效的中和2种假病毒,抑制假病毒对293T-hACE2细胞的感染,该抗体对野生型假病毒的IC50值为0.0614 μg/ml,对突变型假病毒的IC50值为0.3152 μg/ml.结论 成功制备了可替代20A.EU1和B.1.1.7变异毒株的假病毒,可用于针对SARS-CoV-2S蛋白研发出的疫苗或抗体药物疫苗和抗体药物的筛选和相关性能的评价.
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