【摘 要】
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目的 探讨EB病毒(Epstein-Barr vires,EBV)壳抗原VCA-BALF4(S)和VCA-BFRF3重组蛋白在鼻咽癌血清学诊断中的应用.方法 以EBV DNA为模板,采用PCR法扩增目的 基因片段BALF4(S)和
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目的 探讨EB病毒(Epstein-Barr vires,EBV)壳抗原VCA-BALF4(S)和VCA-BFRF3重组蛋白在鼻咽癌血清学诊断中的应用.方法 以EBV DNA为模板,采用PCR法扩增目的 基因片段BALF4(S)和BFRF3,与毕赤酵母表达载体pPICZaA连接,转化酵母菌GS115,甲醇诱导重组蛋白表达.表达产物经SDS-PAGE、免疫印迹法鉴定后,纯化目的 蛋白作为包被抗原,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群EBV-IgA抗体.结果 在毕赤酵母菌中成功高效地表达了分泌型的VCA-BALF4(S)和VCA-BFRF3重组蛋白,相对分子质量分别为37×10~3和18×10~3,免疫印迹证实目的 带均有免疫原性,目的 蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者和健康对照的敏感度和特异度分别为71.0%和91.8%(VCA-BFRF3)、88.7%和96.4%[VCA-BALF4(S)].结论 毕赤酵母系统高效分泌表达了VCA-BALF4(S)和VCA-BFRF3重组蛋白,对两种重组抗原在鼻咽癌血清筛选中的诊断价值进行了初步评估,获得了在鼻咽癌筛选中有一定应用价值的pPICZa-BALF4(S)生产酵母工程菌株.
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