小尾寒羊瘦素长型受体基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建

来源 :中国畜牧兽医 | 被引量 : 0次 | 上传用户:eyx001
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本试验旨在制备用于小尾寒羊瘦素长型受体(1eptinreceptorlongform)基因实时荧光定量PCR的标准品质粒和标准曲线。提取初情期前小尾寒羊下丘脑弓状核组织总RNA,进行反转录合成第1链cDNA,然后进行PCR和目的基因片段的回收;通过T—A克隆将该基因片段插入pMD18-T载体中,构建回收产物的重组质粒;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。重组质粒经PCR扩增和测序,结果表明,瘦素长型受体基因已成功克隆。提示,所构建的瘦素长型受体基因实时荧光定量标准曲线线性关系好,灵
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