目的 探讨CD133基因表达被抑制后对胃癌细胞增殖、侵袭、克隆球形成及化疗药物敏感性的影响.方法 通过免疫磁珠分选KATO-Ⅲ胃癌细胞中的CD133阳性细胞,将合成的CD133小干扰核糖核酸分子(siRNA)转染至KATO-ⅢCD133阳性胃癌细胞内,使用荧光标记的siRNA (FAM-siRNA)检测转染效率,通过RT-PCR、Western-blot方法检测CD133基因表达的沉默效果及上皮-间质转化(EMT)相关因子(E-cadherin、Snail和N-cadherin)的蛋白表达,采用CCK-8、Transwell侵袭实验、单克隆球形成实验和CCK-8等方法分别检测细胞增殖、侵袭、克隆球形成能力及对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性.结果 转染24 h后,转染效率可达到(87.7±8.1)％.干扰组CD133 mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P＜0.01).转染24、48和72 h后,与阴性对照组比较,干扰组细胞的增殖活性均得到显著抑制,差异均有统计学意义(P＜0.01)；转染72 h,干扰组细胞的增殖活性较阴性对照组降低了(52.1±8.0)％.与阴性对照组比较,干扰组的细胞侵袭数减少[(41.7±6.0)比(130.3±11.0),P＜0.05],克隆球形成率降低[(24.3±4.3)％比(45.1±6.4)％,P＜0.01],Snail和N-cadherin蛋白表达降低(P＜0.01),而E-cadherin蛋白表达增高(P＜0.01).干扰组细胞对化疗药物5-FU的敏感性显著增强,5-FU对干扰组细胞的抑制率为(62.4±3.3)％,较阴性对照组的(21.5±2.2)％增加(P＜0.01).结论 CD133基因在胃癌细胞的增殖、侵袭、克隆球形成和化疗抵抗性等方面具有重要作用,可能是胃癌干细胞新型标志物,有望成为胃癌生物治疗的新靶点。
RNA干扰抑制KATO-Ⅲ CD133阳性胃癌细胞CD133基因表达及对其生物学特性的影响
【摘 要】
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目的 探讨CD133基因表达被抑制后对胃癌细胞增殖、侵袭、克隆球形成及化疗药物敏感性的影响.方法 通过免疫磁珠分选KATO-Ⅲ胃癌细胞中的CD133阳性细胞,将合成的CD133小干扰核糖核酸分子(siRNA)转染至KATO-ⅢCD133阳性胃癌细胞内,使用荧光标记的siRNA (FAM-siRNA)检测转染效率,通过RT-PCR、Western-blot方法检测CD133基因表达的沉默效果及上皮-
【机 构】
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201900上海交通大学医学院附属第三人民医院普通外一科,201900上海交通大学医学院附属第三人民医院普通外一科,201900上海交通大学医学院附属第三人民医院普通外一科,201900上海交通大学医
【出 处】
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中华胃肠外科杂志
【发表日期】
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2013年16期
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