【摘 要】
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目的 探讨猪睾丸Sertoli细胞分离、培养的方法 ,并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测,为Sertoli细胞用于移植提供依据.方法 无菌条件下取10～15日龄的湖
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室
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目的 探讨猪睾丸Sertoli细胞分离、培养的方法 ,并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测,为Sertoli细胞用于移植提供依据.方法 无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸,剥离睾丸白膜及表面血管,剪碎后用2.0 g/L V型胶原酶以及2.5 g/L胰蛋白酶和0.5 g/L DNaseI消化(两步法)分离Sertoli细胞,于37℃、含体积分数为5%CO的培养箱中培养.采用倒置相差显微镜观察细胞形态,透射电镜进行超微结构鉴定,流式细胞仪检测细胞体外活率.逆转录聚合酶链反应检测Sertoli细胞sox9、FasL、转化生长因子β(TGF-β)及Clusterin的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞的活性.结果 猪睾丸经分离、培养,所获得的Sertoli细胞纯度达90%以上,培养后的细胞凋亡率为(2.61±0.96)%,死亡率为(2.12±0.74)%;培养的Sertoli细胞稳定表达sox9、TGF-β、Clusterin,而FasL表达较弱.体外培养的Sertoli细胞可以保持良好活性达21 d.结论 采用V型胶原酶以及胰蛋白酶和DNaseI两步法消化分离可获得大量高纯度的Sertoli细胞,该细胞在培养过程中能够稳定表达FasL、TGF-β和Clusterin分子.
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