【摘 要】
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目的 研究多肽MGMT-04模拟O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在人脑胶质瘤原代细胞系SHG-140中抗替莫唑胺(TMZ)耐药的实验.方法 首先设计穿膜肽MGMT-04,并加以FITC示踪,再通过免疫荧光定位MGMT-04多肽可以到达细胞核发挥作用.通过流式细胞术检测各处理组SHG-140细胞凋亡的比例,包括正常对照组,MGMT-0.多肽组,TMZ组,TMZ+ MGMT-04多肽组.通过免疫荧光技术检测上述四组SHG-140细胞BCL2及C-PARP的表达.使用Western Blot法检测
【机 构】
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215006苏州,苏州大学附属第一医院神经外科暨脑神经研究室
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目的 研究多肽MGMT-04模拟O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在人脑胶质瘤原代细胞系SHG-140中抗替莫唑胺(TMZ)耐药的实验.方法 首先设计穿膜肽MGMT-04,并加以FITC示踪,再通过免疫荧光定位MGMT-04多肽可以到达细胞核发挥作用.通过流式细胞术检测各处理组SHG-140细胞凋亡的比例,包括正常对照组,MGMT-0.多肽组,TMZ组,TMZ+ MGMT-04多肽组.通过免疫荧光技术检测上述四组SHG-140细胞BCL2及C-PARP的表达.使用Western Blot法检测上述四组SHG-140细胞中凋亡相关蛋白PARP、Cleaved-PARP、BCL2、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3、BAX、BCL2的表达.结果 流式细胞术检测结果示正常对照组与MGMT-04多肽组的凋亡无明显差异,TMZ组凋亡细胞比例明显增加,而TMZ+ MGMT-04多肽组较TMZ组的凋亡细胞比例下降.免疫荧光染色结果示TMZ+ MGMT-04多肽组较TMZ单组BCL2表达高、Cleaved-PARP表达量降低.Western Blot结果进一步验证与正常对照组相比,经MGMT-04多肽单独处理的相关凋亡蛋白的表达无明显差异,而TMZ组较正常对照组的Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase-3、BAX表达量增加,BCL2的表达量下降,两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05),而TMZ+ MGMT-04多肽组较TMZ组Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase-3、BAX表达量降低,BCL2表达量升高,两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 多肽MGMT-04在人脑胶质瘤原代细胞中具有抗TMZ而增强耐药作用.
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