【摘 要】
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[目的]探索C57BL/6小鼠骨髓来源的原代破骨细胞氯化钴诱导的低氧模型的建立方法.[方法]提取4～6周龄雄性C57BL/6小鼠股骨及胫骨骨髓细胞,通过流式细胞术鉴定单核巨噬细胞(bone
【机 构】
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天津中医药大学中药制药工程学院,天津301617;天津中医药大学中西医结合学院,天津301617;天津医科大学第二附属医院心脏科,天津300211;武警后勤学院卫生勤务系,天津300309;天津医学高
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[目的]探索C57BL/6小鼠骨髓来源的原代破骨细胞氯化钴诱导的低氧模型的建立方法.[方法]提取4～6周龄雄性C57BL/6小鼠股骨及胫骨骨髓细胞,通过流式细胞术鉴定单核巨噬细胞(bone marrow-derived mononuclear macrophages,BMMs)表面标记物;BMMs经巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)和核刺激因子-κB受体配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导4d后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察BMMs向原代破骨细胞诱导分化情况;利用MTT法确定氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)模拟原代破骨细胞低氧浓度;运用Western blotting技术检测原代破骨细胞低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达量.[结果]BMMs簇分化抗原11b(cluster differentiation 11b,CD11b)呈强阳性,阳性率为97.90％;BMMs经过M-CSF和RANKL诱导后,产生了大量破骨细胞,TRAP染色为阳性;MTT和Western blotting技术确定原代破骨细胞CoCl2模拟低氧最相似浓度为50 μmol/L.[结论]本研究成功地将BMMs诱导分化为破骨细胞,采用50 μmol/L的CoCl2可建立该原代破骨细胞的低氧模型.
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