【摘 要】
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目的:探索活性氧(ROS)对类风湿性关节炎(RA)骨破坏的影响.方法:建立Ⅱ型胶原诱导性类风湿性关节炎(CIA)大鼠模型,观察大鼠关节红肿畸形等症状;HE和Masson三色染色观察关节滑
【机 构】
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中国中医科学院中药研究所,北京100700
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目的:探索活性氧(ROS)对类风湿性关节炎(RA)骨破坏的影响.方法:建立Ⅱ型胶原诱导性类风湿性关节炎(CIA)大鼠模型,观察大鼠关节红肿畸形等症状;HE和Masson三色染色观察关节滑膜、软骨、骨组织等病理变化;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察关节破骨细胞生成情况;二氢乙锭(DHE)荧光探针检测关节组织中ROS的表达.体外巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导小鼠原代骨髓巨噬细胞(BMMs)48 h、96 h后,TRAP和鬼笔环肽染色观察破骨细胞形成和分化情况,RT-PCR和免疫荧光技术检测TRAP、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织蛋白酶K(CTSK)mRNA和CTSK、MMP-9蛋白的表达;DCFH-DA探针检测破骨细胞中ROS水平变化.结果:CIA大鼠关节组织呈现炎症细胞浸润、滑膜异常增生、TRAP阳性细胞大量形成,骨破坏严重区域ROS表达明显增强.此外,成功构建体外破骨细胞分化模型,48 h开始出现多核破骨细胞,96 h形成大量成熟破骨细胞.溶骨功能相关因子mRNA和蛋白的表达呈诱导时间依赖性增加,同时ROS的表达呈现趋势性累积;而且,ROS抑制剂NAC明显抑制了破骨细胞的分化.结论:ROS可能通过调控破骨细胞的分化促进RA骨破坏,抑制ROS产生可明显抑制破骨细胞分化.
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