【摘 要】
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目的 联合应用简化无血清培养基和连续传代法,从胚胎14～17 d、新生1 d、新生5 d小鼠肠管分离培养肠神经嵴干细胞(gut neural crest stem cells,GNCSCs),观察其体外培养过程中增殖、分化的特点,用p75、GFAP、Peripherin、α-Actin作为特异性标志来鉴定GNCSCs及其分化的细胞系,比较胚胎和新生小鼠GNCSCs在生长速度、分化细胞的种类及数量上
【机 构】
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河南省人民医院,710004,西安交通大学医学院第二医院小儿外科,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室
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目的 联合应用简化无血清培养基和连续传代法,从胚胎14～17 d、新生1 d、新生5 d小鼠肠管分离培养肠神经嵴干细胞(gut neural crest stem cells,GNCSCs),观察其体外培养过程中增殖、分化的特点,用p75、GFAP、Peripherin、α-Actin作为特异性标志来鉴定GNCSCs及其分化的细胞系,比较胚胎和新生小鼠GNCSCs在生长速度、分化细胞的种类及数量上的差异.方法 取3组小鼠的肠管,分离制成单细胞悬液,接种于DMEM/F12完全培养基贴壁培养,在连续传代培养中观察克隆球的形成;将克隆球接种于含血清培养基,观察其分化现象;用免疫细胞化学和免疫荧光法检测克隆球及其分化细胞系特异性标志物的表达.结果 部分胚胎和新生小鼠肠管细胞在无血清培养基中连续传代培养形成克隆球.在血清刺激下克隆球可分化为多种形态的细胞.克隆球和分化细胞系的免疫染色均为阳性.结论 胚胎和新生鼠肠管内存在具有自我更新能力的GNCSCs,且均可分化为神经元、神经胶质细胞和平滑肌三类细胞.新生鼠较胎鼠GNCSCs生长速度慢,分化的神经元数量减少,神经胶质细胞数量增加,平滑肌细胞无显著变化。
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