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目的
观察小鼠RAW264.7巨噬细胞不同极化状态下lincRNA-cox2表达变化,初步探讨lincRNA-cox2对巨噬细胞极化的影响。
方法以IFN-γ/LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导M1型极化,IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组细胞lincRNA-cox2的表达。设计并合成针对lincRNA-cox2基因的siRNA及无关序列,脂质体转染RAW264.7细胞,48 h后分别加入IFN-γ/LPS或IL-4继续诱导M1/M2型巨噬细胞,采用酶联免疫试验(ELISA)检测细胞因子IL-12及IL-10的分泌量;RT-PCR检测与巨噬细胞极化相关的iNOS、TNF-α、Arg-1、Fizz1的表达。将lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞,检测其对M1极化表型的影响。
结果RT-PCR结果显示,M1型巨噬细胞的lincRNA-cox2表达水平显著高于未极化细胞和M2型巨噬细胞。与对照组相比,lincRNA-cox2-siRNA转染RAW264.7细胞后,经IFN-γ/LPS诱导的M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低,iNOS和TNF-α表达下降;而经IL-4诱导的巨噬细胞中IL-10产生增加,Arg-1和Fizz1表达升高。lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞后,IL-12分泌降低,IL-10产生增加,其特点向M2样巨噬细胞转换。
结论lincRNA-cox2参与调控小鼠巨噬细胞的极化,促进M1型巨噬细胞极化,抑制M2型巨噬细胞极化。