建立一种以TaqMan－MGB荧光探针为特点，检测人类急性早幼粒细胞白血病(M3型)中维甲酸诱导基因G(RIG－G)的实时荧光定量聚合酶链反应(RT－qPCR)方法，并运用该方法对正常人、M3患者外周血中的RIG－G表达水平进行分析，探讨其在M3诊断中的价值。
方法方法学建立。针对人RIG－G基因设计特异性引物和TaqMan－MGB荧光探针，以逆转录的互补DNA为模板，建立TaqMan－MGB实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线；在方法特异性、正确度、精密度、分析灵敏度、干扰物质等各方面对检测方法的性能进行评估，并用该法验证20例M3患者外周血与骨髓中RIG－G表达水平相关性，同时检测40份正常人及20份M3患者标本，t检验比较两组外周血RIG－G水平，用ROC曲线分析其对M3的检测效能。
结果RIG－G标准品拷贝数log值与循环阈值数(Ct)的标准曲线方程为：Y=－3.539X+42.952，R2=0.999，呈良好的线性关系。用建立的实时荧光定量PCR方法检测标准品，结果与已知值比较，相关性系数r=0.999，计算偏倚值均<5%；分别选取高值(107拷贝/μl)、中值(104拷贝/μl)、低值(101拷贝/μl)3个浓度，批内CV分别为1.38%、2.31%、7.56%；批间CV分别为0.71%、1.17%、5.07%，均<10%；该方法的分析灵敏度为101拷贝/μl。M3患者外周血与骨髓中RIG－G表达水平相关系数为r=0.996，斜率b=0.973，结果相关性良好，t=0.099，P>0.05，显示两组标本检测结果差异无统计学意义。40份正常健康体检外周血RIG－G基因的拷贝数[3.62×104(1.61×104 ~4.90×104)拷贝/μl]与M3患者[7.10×102(5.43×102~2.21×103)拷贝/μl]差异有统计学意义(U=18，P<0.001)。
结论成功建立了检测人外周血RIG－G基因的TaqMan－MGB荧光实时定量PCR方法。该法具有较好的正确度、精密度、灵敏度及特异性，能够为临床M3患者的早期诊断及治疗监测提供必要帮助。(中华检验医学杂志，2016, 39：936－940)