探讨环状RNA-波形蛋白(circ-VIM)调控结直肠癌细胞增殖和凋亡的作用及其机制。
方法收集2016年12月至2017年12月，于郑州大学第一附属医院普外科行结直肠癌根治术并经术后病理检查确诊的100例结直肠癌患者的病历资料，以及其癌组织和所对应的癌旁组织(阴性对照)标本。采用实时荧光定量PCR法检测circ-VIM在结直肠癌中的表达水平。采用细胞活性检测试剂盒检测结直肠癌HCT-116和HT29细胞的增殖水平。采用膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶实验检测HCT-116和HT29细胞的凋亡比例。采用5，5′，6，6′-四氯-1，1′，3，3′-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物(JC-1)法检测HCT-116和HT29细胞线粒体势能的变化。采用蛋白质印迹法检测蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的蛋白质表达变化。采用miRDB软件预测circ-VIM的靶miRNA。统计学分析采用t检验和卡方检验。
结果结直肠癌组织中的circ-VIM表达水平为2.387±0.536，高于所对应癌旁组织中的1.110±0.134，差异有统计学意义(t＝23.096，P<0.01)。circ-VIM表达水平在不同肿瘤体积、TNM分期和有无淋巴结转移患者中差异均有统计学意义(P均<0.05)。lenti-circ-VIM组HCT-116和HT29细胞增殖水平分别为0.737±0.023和0.835±0.025，分别高于对照组的0.449±0.020和0.531±0.019，差异均有统计学意义(t＝20.706、－15.374，P均<0.01)。lenti-circ-VIM-shRNA组HCT-116和HT29细胞增殖水平分别为0.236±0.027和0.243±0.019，分别低于对照组，差异均有统计学意义(t＝24.557、－23.197，P均<0.01)。lenti-circ-VIM-shRNA组HCT-116和HT29细胞的凋亡比例分别为(18.00±1.82)%和(20.80±0.61)%，分别高于对照组的(6.64±2.01)%和(7.35±1.36)%，差异均有统计学意义(t＝8.826、17.454，P均<0.01)。lenti-circ-VIM-shRNA组HCT-116和HT29细胞中的JC-1聚合物和JC-1单体荧光强度比值分别为2.21±0.12和1.40±0.11，分别低于对照组的14.54±1.00和9.24±1.18，差异均有统计学意义(t＝－19.558、－15.685，P均<0.01)，说明线粒体膜电位下降。经lenti-circ-VIM-shRNA处理后，HCT-116和HT29细胞内磷酸化蛋白激酶B、磷酸化mTOR、B淋巴细胞瘤-2、线粒体细胞色素C的蛋白质表达水平均下调，胞质细胞色素C、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白、活化型半胱天冬酶3的蛋白质表达水平均上调。circ-VIM表达上调时，miRNA-147b、miRNA-4447、miRNA-3656表达下调；circ-VIM表达下调时，miRNA-147b、miRNA-4447、miRNA-3656表达上调。
结论circ-VIM在结直肠癌中表达异常增高，并且参与调控结直肠癌细胞的增殖和凋亡。