【摘 要】
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根据cFⅨ cDNA(canine FⅨ,cFⅨ)顺序设计引物,采用RT-PCR技术,从狗肝细胞中提取mRNA,逆转录成cFⅨ cDNA,克隆到pGEM-T质粒载体上,经DNA顺序分析,挑选克隆,拼接并测序鉴定,得
【机 构】
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复旦大学遗传学研究所,上海,200433
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根据cFⅨ cDNA(canine FⅨ,cFⅨ)顺序设计引物,采用RT-PCR技术,从狗肝细胞中提取mRNA,逆转录成cFⅨ cDNA,克隆到pGEM-T质粒载体上,经DNA顺序分析,挑选克隆,拼接并测序鉴定,得到DNA顺序完全正确且含有cFⅨ完整编码区的cDNA,进一步构建成以G1Na为框架的反转录病毒载体G1NaCcⅨ(hCMV启动子控制cFⅨ转录)和G1NaMBcⅨ(MCK增强子和β-actin启动子共同控制cFⅨ转录),并用于反转录病毒介导的基因转移.狗原代皮肤成纤维细胞实验结果显示,cFⅨ能够在狗皮肤成纤维细胞中表达,表达水平分别为G1NaCcⅨ:173 ng/106 细胞.24 h;G1NaMBcⅨ:211ng/106细胞.24 h.此结果为血友病B狗基因治疗动物试验的开展奠定了基础.
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