【摘 要】
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流感病毒血凝素蛋白（hemagglutinin,HA）的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽（aa428–452）反应的单克隆抗体（5D3-1B5）。为系统评价其生物学特性,本研究测定了5D3-1B5的抗体效价（IgG、血凝抑制与病毒中和滴度）,鉴定了抗体识别的抗原表位与编码基因的序列及结构,并评价了抗体与不同亚型流感
【机 构】
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扬州大学农业农村部畜禽传染病学重点开放实验室
【基金项目】
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国家重点研发计划（2016YFD0501601）； 江苏省人兽共患病学重点实验室开放课题（R1808）； 现代农业产业技术体系专项资金（CARS-40）； 江苏高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）~~；
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流感病毒血凝素蛋白（hemagglutinin,HA）的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽（aa428–452）反应的单克隆抗体（5D3-1B5）。为系统评价其生物学特性,本研究测定了5D3-1B5的抗体效价（IgG、血凝抑制与病毒中和滴度）,鉴定了抗体识别的抗原表位与编码基因的序列及结构,并评价了抗体与不同亚型流感病毒的交叉反应性。结果显示,5D3-1B5不具有针对H7N9病毒的血凝抑制与病毒中和活性,但是与HA蛋白的反应性较强;基于多肽的酶联免疫吸附试验与噬菌体表面展示随机多肽文库筛选的方法,鉴定了5D3-1B5识别的表位是位于HA茎部C螺旋区的431W-433Y-437L基序,且含有该表位突变的重组H7N9病毒失去了与抗体的反应性;测定了抗体可变区的基因序列并定位了轻链与重链可变区的互补决定区;抗体可变区的结构模拟与分子对接则验证了抗体与HA蛋白茎部C螺旋区的结合;值得注意的是,5D3-1B5与group 1和2不同亚型的流感病毒具有广谱反应性。因此,5D3-1B5具有作为流感病毒广谱检测与抗体治疗制剂的应用潜力,研究结果也为认识H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的抗原表位特征提供了新的信息。
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