论文部分内容阅读
目的 探讨孕中期羊水来源的胎儿间充质干细胞(MSC)体外诱导为平滑肌细胞的可能性.方法 通过超声引导下羊膜腔穿刺获取人孕18～22周羊水,分离细胞,体外培养传代,机械方法挑取MSC克隆,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,以0.01 ng/ml、0.1 ng/ml、1 ng/ml和10 ng/ml浓度的转录生长因子β(TGF-β)分别诱导第3代MSC 28 d,免疫组化染色检测各浓度TGF-β诱导后α-Actin在细胞内表达情况,透射电镜观察1 ng/mlTGF-β诱导28 d后细胞内肌丝含量,激光共聚焦显微镜测定该浓度组细胞在乙酰胆碱刺激下细胞内液钙离子浓度的变化.结果 羊水来源的胎儿MSC在体外培养体系中增殖迅速,流式细胞仪检测结果显示CD44表达阳性,CD34、CD45和HLA-DR阴性.经1 ng/ml TGF-β诱导28 d后,细胞形态呈长梭形平滑肌样,融合后细胞分布形成特征性的"峰"和"谷"状,同时表达平滑肌细胞特异性蛋白标志α-Actin,细胞内出现黑色棒状肌丝,激光共聚焦显微镜显示该浓度TGF-β诱导后细胞内液钙离子基础值明显高于未诱导的细胞,在乙酰胆碱刺激下,细胞内液钙离子呈波峰样释放.结论 羊水来源的胎儿MSC在体外可以定向分化为平滑肌细胞。