研制了用于定量检测人血清中25-羟基维生素D(25-OHD)水平的化学发光法检测试剂盒,并对试剂盒各项性能指标进行验证。试剂盒建立的方法为:将25-OHD单克隆抗体包被于微孔板中,将血清样品与释放剂同时加入微孔板中进行孵育,使样品的25-OHD充分释放出来并与包被板上的25-OHD抗体相结合。再加入酶结合物(生物素化25-OHD和链霉亲和素化过氧化物酶(SA-HRP)的混合物),使之与25-OHD抗体相结合,形成竞争免疫复合物,随后洗涤除去未结合的物质,加入化学发光底物,使用化学发光免疫分析仪读取相对发光强度(RLU)。制备的25-OHD检测试剂盒最低检出限为4.9 ng/m L,准确度相对偏差在±10%以内,批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,2℃~8℃存放有效期为1年。对200份临床血清样本进行检测,与参比试剂盒检测结果的相关系数R=0.9717。试剂盒各项性能指标均符合行业标准要求,具有灵敏,稳定,快速,简便等特点。