【摘 要】
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目的:制备青杄FKBP12基因的多克隆抗体,为进一步分析FKBP12的蛋白定位、表达等提供基础.方法:采用PCR方法扩增FKBP12基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET -
【机 构】
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北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室
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目的:制备青杄FKBP12基因的多克隆抗体,为进一步分析FKBP12的蛋白定位、表达等提供基础.方法:采用PCR方法扩增FKBP12基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET - 48b中,转化入BL21菌株.经IPTG诱导,表达了分子量约为33kD的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物.此蛋白经亲和纯化后,作为抗原注射新西兰兔,进行抗体制备.结果:成功获取了多克隆抗体,制备的FKBP12兔抗血清效价在1:729 000以上,ELISA结果表明融合蛋白具良好的免疫原性.间接ELISA法检测纯化后抗体效价,表明纯化后抗FKBP蛋白兔多克隆抗体效价高,检测灵敏度为16ng/mL.结论:所制备的抗体能满足后续试验要求的效价值,为进一步研究提供基础.
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