【摘 要】
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目的探讨IκB激酶(IKK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对Myc过表达诱导的小鼠原发性肝癌发生发展的影响。方法利用转基因小鼠将LAP-tTA小鼠与Alb-cre小鼠杂交，再与NEMOf1(NEMO为NF-κB必需调节蛋白)小鼠杂交，以产生LAP-tTA＋/Alb-cre＋/NEMOfl/wt小鼠，最后与tetO-Myc＋小鼠杂交。本实验包括4组：(1)WT小鼠；(2)NEMOΔLPC小鼠(
【机 构】
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苏州大学附属第三医院肿瘤生物诊疗中心 江苏省肿瘤免疫治疗工程技术研究中心 苏州大学细胞治疗研究院，常州 213003,苏州大学附属第三医院肿瘤生物诊疗中心 江苏省肿瘤免疫治疗工程技术研究中心 苏州大学
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目的探讨IκB激酶(IKK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对Myc过表达诱导的小鼠原发性肝癌发生发展的影响。
方法利用转基因小鼠将LAP-tTA小鼠与Alb-cre小鼠杂交，再与NEMOf1(NEMO为NF-κB必需调节蛋白)小鼠杂交，以产生LAP-tTA＋/Alb-cre＋/NEMOfl/wt小鼠，最后与tetO-Myc＋小鼠杂交。本实验包括4组：(1)WT小鼠；(2)NEMOΔLPC小鼠(肝细胞中NEMO敲除，无Myc过表达)；(3)MycLAP-tTA小鼠(Myc过表达，无NEMO敲除)；(4)MycLAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠(肝脏Myc过表达和NEMO敲除)。记录小鼠的生存曲线，观察肝脏大体形态。苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理结构，免疫组织化学染色、蛋白质印迹法(Western blot)检测肝脏肿瘤指标及肝祖细胞指标、定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测相关蛋白的mRNA水平。使用t检验比较独立样本组与相应组。
结果小鼠带瘤生存曲线显示MycLAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠中位生存期明显短于MycLAP-tTA小鼠(中位生存期M/P50 56 d比83 d，P<0.01)；MycLAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠对比MycLAP-tTA小鼠，谷草转氨酶[(739.40±35.61) U/L比(441.50±78.79) U/L，t＝2.464，P<0.05]、碱性磷酸酶[(3 142.0±287.6) U/L比(1 702.0±278.8) U/L，t＝3.129，P<0.01]、γ-谷氨酰基转移酶[(101.70±12.82) U/L比(37.31±9.34) U/L，t＝3.927，P<0.01]和总胆红素[(1.281±0.232) mg/dl比(0.618±0.051) mg/dl，t＝3.889，P<0.01]均显著升高，且差异有统计学意义；Western blot检测显示细胞角蛋白19(CK19)、性别决定区Y框蛋白9(SOX9)水平在MycLAP-tTA/NEMOΔLPC较MycLAP-tTA组小鼠肝脏亦明显升高；肝祖细胞标志物如角蛋白(CK19，4.336±1.970比0.680±0.234，t＝1.843，P<0.01)、CK7(3.884±0.338比2.370±0.525，t＝2.422，P<0.01)、甲胎蛋白(AFP，3 614.0±2 070.0比1 399.0±319.9，t＝1.057，P<0.01)、上皮细胞黏附分子(EpCAM)的mRNA水平在MycLAP-tTA/NEMOΔLPC较MycLAP-tTA组小鼠肝脏显著增高(7.900±0.997比3.084±0.711，t＝3.943，P<0.01)。
结论肝细胞中特异性敲除NEMO从而抑制经典的IKK/NF-κB信号通路，可促进肝肿瘤的发生发展，并诱导混合型肝细胞癌-胆管细胞癌的发生。白细胞介素(IL)-6/信号转导与转录激活因子-3(STAT3)通路与细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路可能参与混合型肝癌的发生发展。
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