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以氧化葡萄糖酸杆菌和巨大芽孢杆菌混合培养物的无细胞抽提液为基本反应液，在试管中建立了Vc二步发酵离体实验系统.将底物山梨糖加入反应体系后在pH 7.0, 35℃下保温24 h， 2-酮基-L-古龙酸生成. 加入巨大芽孢杆菌胞外活性物质对离体系统的产酸没有影响，一定量的L-山梨糖脱氢酶可促进产酸.试验了pH、θ/℃、金属离子、电子受体、去污剂等对该系统产酸的影响，并就其作用机理进行了探讨，结果表明离体系统产酸的最适pH和θ/℃分别是8和40℃，Fe3+促进产酸，Co2+抑制产酸，2,6-二氯酚定酚作为电子受