目的建立检测ɑ-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorɑ,TNF-ɑ)的吖啶酯化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)方法并进行验证。方法采用全自动化学发光分析仪,用吖啶酯标记TNF-ɑ多克隆抗体,生物素标记TNF-ɑ单克隆抗体,链霉亲和素包被磁颗粒,利用磁颗粒-链霉亲和素-生物素系统实现固相和液相的分离,建立检测TNF-ɑ的吖啶酯CLIA方法;验证方法的检测限、线性范围、准确性、精密度及特异性,用优化后的方法检测150份健康血清样本确定正常参考值范围。应用该方法与西门子immulite1000试剂盒平行测定75份TNF-ɑ血清样本。结果吖啶酯CLIA方法反应条件为加入50μL样本,用PBS-1%BSA稀释校准品,加入1∶2 000稀释生物素及吖啶酯标记抗体。该方法最低检测限为0. 245～0. 519 pg/mL,样本在5～1 000 pg/mL范围r均大于0. 990 0;TNF-ɑ质控品回收率为92. 6%～104. 9%,3种浓度质控品批内CV <5%,总CV <10%;对溶血、脂血、类风湿因子及常见肿瘤药等干扰率均小于10%;系统检测值可溯源至国际标准品。150份健康血清样本正常参考值范围确定为<10 pg/mL。该方法与西门子TNF-ɑ蛋白检测试剂盒相关系数r=0. 989 0;检测值之间差异呈现随机化,无系统误差。结论成功建立了优化检测TNF-ɑ的吖啶酯CLIA方法,该方法精密度高、线性范围广、特异性强、检测结果准确性好,适合临床推广使用。