【摘 要】
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目的体外获得人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)临床病毒株UL148 RNA及探讨其基因功能。方法将感染HCMV的新生儿尿液接种人胚肺细胞，分离HCMV临床病毒株，并经多重PCR鉴定。扩增UL148基因，经双酶切后克隆入pGEM-T-Easy质粒，构建重组质粒，并置于T7启动子下游，经重组质粒、PCR产物、双酶切产物电泳鉴定及序列测定。克隆成功的质粒以32P标记，
【机 构】
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目的体外获得人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)临床病毒株UL148 RNA及探讨其基因功能。
方法将感染HCMV的新生儿尿液接种人胚肺细胞，分离HCMV临床病毒株，并经多重PCR鉴定。扩增UL148基因，经双酶切后克隆入pGEM-T-Easy质粒，构建重组质粒，并置于T7启动子下游，经重组质粒、PCR产物、双酶切产物电泳鉴定及序列测定。克隆成功的质粒以32P标记，进行体外转录RNA。根据UL148序列特征应用生物信息学分析其翻译后修饰位点。
结果成功在体外获得HCMV临床病毒株，经电泳及序列测定证实重组质粒构建成功，在T7 RNA聚合酶作用下，体外获得UL148 RNA。翻译后修饰位点显示UL148基因存在1个与细胞黏附相关的特征序列，1个豆荚外源凝集素β-链标记位点、2个N-豆蔻酰化位点，1个酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点，7个蛋白激酶C磷酸化位点，1个cAMP/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点和2个N-糖基化位点，1个跨膜区域。
结论UL148基因编码产物可能为一个病毒黏附分子，参与宿主细胞的信号转导作用。
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