【摘 要】
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为了解山羊TLR4的分子结构、表达特性和免疫调节功能,试验以NCBI中山羊TLR4基因预测序列为模板,采用RACE扩增技术获得初生羔羊TLR4基因cDNA序列,并进行生物信息学分析,利用qR
【机 构】
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四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室,成都,610066;四川富顺县农牧业局,四川富顺,643200;凉山州畜牧兽医科学研究所,四川西昌,615000;自贡市六顺养殖开发有限公司,四川富顺
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为了解山羊TLR4的分子结构、表达特性和免疫调节功能,试验以NCBI中山羊TLR4基因预测序列为模板,采用RACE扩增技术获得初生羔羊TLR4基因cDNA序列,并进行生物信息学分析,利用qRT-PCR技术检测羔羊各组织TLR4基因表达量,构建pEGFP-N1-TRL4重组质粒检测在真核细胞中的凋亡功能.结果表明:克隆得到TLR4基因cDNA序列长2 728 bp,CDS全长2 526 bp,编码841个氨基酸.山羊TLR4蛋白是1个跨膜蛋白,胞外包含2个LRRs-RI、1个LRRs8及1个TP-KR-C2,胞内含有TIL受体结构域、77个潜在磷酸化位点、9个糖基化位点,且与绵羊TLR4氨基酸序列同源性最高.TLR4基因在脾脏中的表达量较高(P＜0.05),肝脏、胸腺和肾脏依次减少,颌下腺、肺脏及血液较脾脏显著降低(P＜0.05).说明试验成功构建具有TLR4基因完整CDS序列的pEGFP-N1-TLR4重组载体,且能够在HEK293T细胞中正常表达,具有加快细胞凋亡的作用.山羊TLR4基因编码蛋白具有免疫学结构和功能特征,在免疫器官中可能参与细胞凋亡过程.
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