【摘 要】
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目的建立能单管同时检测JAK2 V617F突变和外显子12突变的方法。方法以PC-3细胞株DNA为野生型对照，分别以HEL细胞株DNA和含有JAK2外显子12突变的质粒作为JAK2 V617F突变和外显子12突变的阳性对照，采用多重PCR扩增不同DNA片段，并结合高分辨熔解曲线法建立检测JAK2 V617F 和外显子12突变的联合检测体系。同时选取42例真性红细胞增多症患者，分别采用上述方法和常规
【机 构】
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200040上海，复旦大学附属华山医院中心实验室,200040上海，复旦大学附属华山医院检验科,200040上海，复旦大学附属华山医院检验科,200040上海，复旦大学附属华山医院中心实验室,2000
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目的建立能单管同时检测JAK2 V617F突变和外显子12突变的方法。
方法以PC-3细胞株DNA为野生型对照，分别以HEL细胞株DNA和含有JAK2外显子12突变的质粒作为JAK2 V617F突变和外显子12突变的阳性对照，采用多重PCR扩增不同DNA片段，并结合高分辨熔解曲线法建立检测JAK2 V617F 和外显子12突变的联合检测体系。同时选取42例真性红细胞增多症患者，分别采用上述方法和常规方法在外周血中检测JAK2的2种突变。
结果采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法成功建立了JAK2突变联合检测体系，能够同时检测JAK2 V617F突变和外显子12突变，2种突变的检测灵敏度皆可达5%，2种扩增片段的溶解温度（Tm）的批间及批内变异系数都小于0.01%。42例真性红细胞增多症患者中，发现37例携有JAK2 V617F突变，在5例JAK2 V617F突变阴性真性红细胞增多症病例中检出2例JAK2 外显子12突变。与常规方法相比，结果符合率达到100%。2例JAK2 外显子12突变经克隆测序确认突变类型为H538K539delinsL和F537-I546dul10+F547L。
结论该方法可同时在外周血中检测出JAK2 的2种突变，将有助于对骨髓增殖性肿瘤尤其是真性红细胞增多症的分子诊断。（中华检验医学杂志，2014,37：194-197）
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