[目的]旨在对鸡源丁酸梭菌进行分离鉴定与安全性评估.[方法]利用厌氧培养方法对源自汶上芦花鸡与SPF鸡粪便样品进行丁酸梭菌的分离与纯化,挑选可疑菌落进行微生物质谱鉴定,进一步通过16S rRNA基因测序进行鉴定,16S rRNA测序结果与NCBI核苷酸数据库中丁酸梭菌的16S rRNA序列进行同源性分析;同时,进行所有分离株对氧氟沙星、头孢吡肟等9种药物的药敏试验,利用PCR方法进行mefA等23种耐药基因扩增,基于益生菌安全要求对样品进行alpha等4种梭菌毒素基因以及typeA等4种肉毒毒素基因的测定.[结果]共分离鉴定了24株丁酸梭菌.24株均对氧氟沙星等7种抗生素表现为敏感,L-l、L-6、L-12仅对新霉素表现为中介,L-19仅对头孢吡肟表现为中介.全部菌株的mefA等16种耐药基因结果全部为阴性,sul2、flor、blaTEM3种耐药基因全部呈阳性,tetC携带率为79.2％,cmlA携带率为45.8％,blaOXA携带率为37.5％,aadB携带率为12.5％,qnrA携带率为4.2％.PCR结果显示所有分离菌株的alpha、beta、epsilon、iota等4种梭菌毒素基因携带率0％.全部分离菌株均未携带typeA、typeB、typeE、typeF4种肉毒毒素基因.[结论]结果表明,从未饲喂抗生素和丁酸梭菌的汶上芦花鸡与SPF鸡群中获得的24株丁酸梭菌分离株达到预期的安全性要求,可作为益生添加菌的筛选参考株.