【摘 要】
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目的 探讨人胚胎干细胞(hESC)体外诱导制备成熟红细胞的潜能.方法 通过三阶段方案诱导hESC向红细胞分化,并通过流式细胞术检测造血干/祖细胞及红细胞表面标志物的变化,通过细
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所军事再生医学研究室,北京 100850;华南干细胞与再生医学研究中心,广州 510005;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850;华南干
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目的 探讨人胚胎干细胞(hESC)体外诱导制备成熟红细胞的潜能.方法 通过三阶段方案诱导hESC向红细胞分化,并通过流式细胞术检测造血干/祖细胞及红细胞表面标志物的变化,通过细胞染色和形态学分析判断红细胞的成熟程度;用实时定量PCR(qRT-PCR)分析不同时间点关键调控基因和珠蛋白链的表达,并以高效液相色谱法(HPLC)检测诱导所得红细胞(cRBC)不同珠蛋白链的表达量;应用血氧分析仪对诱导所得红细胞的血红蛋白(cRBC-Hb)进行功能分析.结果 定向诱导可获得CD235/CD71双阳性>80%的红细胞,细胞具有红系细胞形态和携氧能力,但hESC诱导获得的cRBC中β类珠蛋白的表达以γ-珠蛋白为主,cRBC-Hb氧饱和度为50%时的氧分压(P50)也低于成人Hb标准品检测值.实时定量PCR检测发现,伴随诱导过程胚胎干细胞干性基因表达迅速下调,与造血干细胞自我更新、增殖、分化相关基因SCF、HOXB4、Notch-1、Runx1、WNT5、PU.1和SCL,以及红系定向分化调控基因EPOR、EKLF、GATA1和MYB阶段性开启表达,但调控成人型β-珠蛋白表达的EKLF和BCL11A在诱导结束阶段处于较低的表达水平.结论 hESC在体外能向红系诱导分化,关键调控基因程序化地表达,hESC具有体外制备功能红细胞的潜能,但现有的诱导体系获得的cRBC类似于胎儿红细胞.
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目前,高职医药卫生类各专业解剖学、组织胚胎学、生理学等基础课多整合为1门课如“解剖生理学”或“人体结构与功能”等[1]。整合后,减少了学科之间的重复,避免了学科之间的脱节[2-3]。但整合也存在教材不能很好满足不同专业对解剖学等知识的需求[4-5],以及过于强调理论性、系统性,而与临床工作的衔接不紧密,不实用等问题[6]。医学检验技术专业作为医学类小专业,同样面临此种问题。为进一步优化解剖学等教学内容,突出临床应用,在医学检验技术专业依照实用、够用的原则,通过调查问卷法针对解剖学、组织学胚胎学、生理学课程
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