鲤鱼(Cyprinus Carpio)促性腺激素基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

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采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从鲤鱼脑垂体获得了两种GtHβ亚基的cDNA,克隆在pMD18-T载体。经测序确证后,将这两个基因克隆到原核表达载体pET-32(a)中,转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IFFG诱导融合蛋白的高效表达。利用初步纯化后的抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。应用制备的兔抗血清与抽提的鲤鱼脑垂体的总蛋白分别进行Westem-blot及ELISA分析,结果显示获得的多抗能特异识别各自的天然蛋白。该结果为纯化天然GtH蛋白提供了有效的检测手段,为进一步制
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