【摘 要】
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分别制备出高可溶性的抗水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)核蛋白纳米抗体VSVNb和重组截短型铁蛋白与抗VSV核蛋白串联的多聚纳米抗体的融合蛋白FnL-VSV,并对融合蛋白VSVNb和FnL-VSV在VSV诊断中的应用进行了初步探索.从羊驼(Vicugna pacos)中获得抗VSV核蛋白的纳米抗体序列,命名为VS-VNb;从激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中分离出来的铁蛋白(encapsulin)进行截短后,和从羊驼中获得的抗VSV核蛋白的纳
【机 构】
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河南农业大学农业农村部动物生物化学与营养重点开放实验室,河南郑州450046
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分别制备出高可溶性的抗水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)核蛋白纳米抗体VSVNb和重组截短型铁蛋白与抗VSV核蛋白串联的多聚纳米抗体的融合蛋白FnL-VSV,并对融合蛋白VSVNb和FnL-VSV在VSV诊断中的应用进行了初步探索.从羊驼(Vicugna pacos)中获得抗VSV核蛋白的纳米抗体序列,命名为VS-VNb;从激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中分离出来的铁蛋白(encapsulin)进行截短后,和从羊驼中获得的抗VSV核蛋白的纳米抗体序列进行串联,命名为FnL-VSV.载体构建后用大肠杆菌表达系统进行融合蛋白的原核表达,经Ni2+纯化后获得单一纳米抗体VSVNb;经硫酸铵盐析纯化得到单一融合蛋白FnL-VSV,并进行电镜检测.将制备的重组蛋白VSVNb和FnL-VSV分别进行HRP标记后,和VSV毒株用作直接ELISA试验.结果 表明,原核表达与纯化后获得了纯度较高的融合蛋白VSVNb和FnL-VSV;电镜结果显示,重组蛋白FnL-VSV自组装形成了直径为20 nm纳米样颗粒;直接ELISA检测结果表明,在抗原浓度一定的条件下,重组蛋白VSVNb和FnL-VSV均与特异性抗原VSV毒株在较低浓度条件下结合,具有较高活性,且重组蛋白FnL-VSV比VSVNb D450nm数值更大;而在重组蛋白VSVNb和FnL-VSV浓度一定的条件下,其能敏感的识别低浓度到高浓度区间的特异性抗原.本试验建立了稳定获得重组蛋白VSVNb和FnL-VSV重组蛋白质的方法,并初步探索了其在直接ELISA中的使用.成功制备了重组蛋白VSVNb和FnL-VSV,为进一步研究纳米抗体在VSV的诊断及后续抗病毒药物的研究奠定了基础.
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为检测石榴花水提物(pomegranate flower water extract,PFW)中的主要活性成分及抗炎功效,采用显色法通过紫外分光光度仪对PFW中多糖、黄酮、生物碱、皂苷、多酚、蛋白等活性成分含量进行了检测,通过急性毒性试验确定了PFW的安全性,最后通过测定PFW对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀的抑制作用、血清细胞因子分泌及HE染色切片检测,确定PFW的抗炎作用.结果 显示,PFW中主要活性成分为多糖和多酚,含量分别为(43.84±1.94)％和(22.44±1.62)％,其余活性成分含量均低于1
为掌握福建省种鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的流行情况,采用ELISA方法对福州、莆田和龙岩3个地区6个种鸡场2470份血清样品和2848枚初产蛋分别进行ALV-J抗体和ALV p27抗原检测.结果 显示,福建地区的种鸡场均不同程度感染ALV,ALV-J抗体总阳性率为4.62％,且公鸡的阳性率低于母鸡,龙岩地区的ALV-J抗体阳性率最高,ALV p27抗原总阳性率为7.87％;蛋种鸡和肉种鸡均能感染ALV,蛋种鸡的ALV p27抗原阳性率明显低于肉种鸡;禽白血病阳性率在不同品系种鸡中存在差异,福建地方
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将120只1日龄商品代白羽肉鸡随机分为2组:对照组(铜含量11mg/kg)、高铜组(铜含量330mg/kg).并于试验49 d,采集盲肠组织及其内容物,制作组织切片观察组织变化,原子吸收法检测盲肠内容物铜含量,16S rDNA高通量测序检测盲肠内容物中微生物菌群结构和多样性.结果 显示,与对照组相比,高铜组盲肠中铜含量极显著升高(P＜0.01),且盲肠组织切片可以看出,高铜组盲肠绒毛高度显著降低(P＜0.05),隐窝深度显著增高(P＜0.05),绒毛高度与隐窝深度比值极显著降低(P＜0.01).微生物测序
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通过体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,分析内源性和外源性前列腺素D2 (PGD2)对大肠杆菌诱导的促炎性细胞因子(TNF-α和IL-1β)、抗炎因子(IL-10)和趋化因子(RANTES)分泌的影响.结果 显示,大肠杆菌诱导的巨噬细胞PGD2合成分泌依赖于细胞中TLR2(TLR2)、TLR4 (TLR4)和NLRP3 (NLRP3)的存在.大肠杆菌诱导的巨噬细胞细胞因子分泌一定程度上依赖于内源性PGD2的合成分泌(P＜0.001).此外,外源性PGD2能够上调大肠杆菌刺激后巨噬细胞促炎性细胞因子(TNF-α和IL
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