【摘 要】
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目的:研究促红细胞生成素在体外对新生猪胰岛细胞增殖分化和凋亡的影响.方法:采用胶原酶消化和组织培养方法分离纯化新生猪胰岛细胞,检测其纯度和活性,再分为实验组和对照组.
【机 构】
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中南大学湘雅三医院内分泌科,湖南省儿童医院肾内科
【基金项目】
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Research Foundation of Department of Public Health of Hunan Province,P.R. China;
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目的:研究促红细胞生成素在体外对新生猪胰岛细胞增殖分化和凋亡的影响.方法:采用胶原酶消化和组织培养方法分离纯化新生猪胰岛细胞,检测其纯度和活性,再分为实验组和对照组.实验组培养基中添加促红细胞生成素(10.0 μmol/L),对照组不添加促红细胞生成素,培养5 d后行低糖和高糖刺激胰岛素释放试验;并行细胞计数及MTT比色法测细胞增殖活性;流式细胞仪和EB/AO染色荧光检测细胞凋亡百分率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR法检测胰岛细胞胰岛素促进因子-1(PDX-1),葡萄糖转运载体2(GlUT-2),bcl-2,bax,caspase-3 mRNA的表达.结果:促红细胞生成素干预后新生猪胰岛细胞不改变形态和功能,对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应正常;细胞计数示实验组新生猪胰岛细胞数目均比对照组增多(P＜0.05);随着培养时间延长,实验组和对照组吸光度值均呈上升趋势,且实验组的吸光度值均高于对照组(P＜0.05),实验组PDX-1 mRNA表达稍有上调(P＜0.05),而GlUT-2 mRNA表达无明显差别(P=0.34).流式细胞仪和EB/AO染色荧光检测实验组的凋亡百分率均较对照组降低(P＜0.01).RT-PCR示实验组bcl-2 mRNA较对照组上调,而bax和 caspase-3 mRNA明显下调(P＜0.01).结论:促红细胞生成素在体外能促进新生猪胰岛细胞的增殖分化,对形态和功能无影响.促红细胞生成素对新生猪胰岛细胞有抗凋亡保护作用,可能是通过上调bcl-2 mRNA的表达,下调bax,caspase-3 mRNA的表达来实现的.
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