目的用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)建立补骨脂中新补骨脂异黄酮的含量测定方法。方法使用色谱柱Wonda SilC18(150.0 mm×4.6 mm,5μm),以0.05%三氟乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,采用梯度洗脱HPLC法,流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量为20μl。100%甲醇超声30 min提取新补骨脂异黄酮。同种浓度的对照品溶液重复进样6次测定对照品的精密度。平行制备6份新补骨脂异黄酮样品溶液以检测样品溶液的重复性。同一新补骨脂异黄酮样品溶液不同时间段进样5次,测样品溶液的稳定性。平行制备6份样品溶液加入等量的对照品计算加样回收率。结果通过优化色谱条件,建立了中药补骨脂中新补骨脂异黄酮含量的测定方法,考察了专属性、标准曲线、检测限与定量限、精密度、重复性、稳定性、加样回收率。通过方法学考察,新补骨脂异黄酮的线性回归方程为:A=79 375C-9 063.7,R2=0.999,在0.75~12.00μg/ml的浓度范围内,新补骨脂异黄酮的浓度与峰面积呈良好的线性关系。样品平均加样回收率为97.51%,RSD=1.21%(n=6)。精密度、重复性、稳定性及回收率均良好。不同来源的补骨脂药材中新补骨脂异黄酮的含量差异有统计学意义。结论结果表明所建立的补骨脂中新补骨脂异黄酮的HPLC检测方法操作简便、准确可靠,具有较好的重复性与稳定性,适用于补骨脂的质量控制。