【摘 要】
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目的:探讨lncRNA FOXD3-AS1靶向miR-128-3p调控缺氧复氧肠黏膜上皮细胞氧化应激损伤的分子机制研究.方法:将人正常结直肠黏膜上皮细胞系FHC分为NC组、缺氧/复氧(H/R)组、si-NC+H/R组、si-lncRNA FOXD3-AS1+H/R组、pcDNA组、pcDNA-lncRNA FOXD3-AS1组、miR-NC+ H/R组、miR-128-3p+ H/R组、anti-miR-NC+si-lncRNA FOXD3-AS1+H/R组、anti-miR-128-3p+ si-lnc
【机 构】
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湖北文理学院附属医院/襄阳市中心医院儿科,湖北襄阳441021
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目的:探讨lncRNA FOXD3-AS1靶向miR-128-3p调控缺氧复氧肠黏膜上皮细胞氧化应激损伤的分子机制研究.方法:将人正常结直肠黏膜上皮细胞系FHC分为NC组、缺氧/复氧(H/R)组、si-NC+H/R组、si-lncRNA FOXD3-AS1+H/R组、pcDNA组、pcDNA-lncRNA FOXD3-AS1组、miR-NC+ H/R组、miR-128-3p+ H/R组、anti-miR-NC+si-lncRNA FOXD3-AS1+H/R组、anti-miR-128-3p+ si-lncRNA FOXD3-AS1+H/R组.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞lncRNA FOXD3-AS1和miR-128-3p表达水平.细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力.流式细胞术检测细胞凋亡.试剂盒分别检测细胞中活性氧(ROS)活性、丙二醛(MDA)含量和3-硝基酪氨酸(3-NT)水平.蛋白质印迹法(Westem blot)检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、Bax蛋白表达.双荧光素酶报告实验检测lncRNA FOXD3-AS1和miR-128-3p靶向关系.结果:与NC组比较,H/R组FHC细胞中lncRNA FOXD3-AS1表达水平显著提高,miR-128-3p表达水平显著降低(P＜0.05),而且H/R处理使细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,氧化应激水平显著升高(P＜0.05);与si-NC+H/R组比较,si-lneRNA FOXD3-AS1+H/R组FHC细胞中lncRNA FOXD3-AS1表达水平显著降低,细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,氧化应激水平显著降低(P＜0.05).与miR-NC+ H/R组比较,miR-128-3p+ H/R组FHC细胞中miR-128-3p表达水平显著降低,细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,氧化应激水平显著降低(P＜0.05).与anti-miR-NC+si-lncRNA FOXD3-AS1+H/R组比较,anti-miR-128-3p+ si-lncRNA FOXD3-AS1+H/R组FHC细胞中miR-128-3p表达水平显著降低,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,氧化应激水平显著升高(P＜0.05).结论:抑制lncRNA FOXD3-AS1表达水平可通过上调miR-128-3p抑制H/R肠黏膜上皮细胞氧化应激损伤.
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