【摘 要】
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目的 探讨miR-129-5p对骨肉瘤(OS)细胞增殖和迁移的影响以及对HMGB1的调控作用.方法 RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p和HMGB1的表达.生物信息学预测miR-129-5p与HMGB1基因是否存在结合位点,双荧光素酶报告基因检测验证miR-129-5p和HMGB1的相互作用.将miR-129-5p模拟物和抑制物分别转染到miR-129-5p表达量较低和较高的骨肉瘤细胞株中,RT-PCR检测转染
【机 构】
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730000 兰州,兰州大学第一临床医学院;730000 兰州,兰州大学第一临床医学院;730000 兰州,兰州大学第一医院骨科
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目的 探讨miR-129-5p对骨肉瘤(OS)细胞增殖和迁移的影响以及对HMGB1的调控作用.方法 RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p和HMGB1的表达.生物信息学预测miR-129-5p与HMGB1基因是否存在结合位点,双荧光素酶报告基因检测验证miR-129-5p和HMGB1的相互作用.将miR-129-5p模拟物和抑制物分别转染到miR-129-5p表达量较低和较高的骨肉瘤细胞株中,RT-PCR检测转染效率.转染成功后分别用CCK-8法、划痕实验和Transwell迁移实验检测OS细胞株的增殖和迁移能力;Western blot检测转染后OS细胞株中HMGB1的表达.结果 miR-129-5p在OS细胞中的表达低于正常成骨细胞(P<0.05),HMGB1在OS细胞株中的表达高于正常成骨细胞(P<0.05).miR-129-5p和HMGB1基因存在结合位点,miR-129-5p mimic转染能下调HMGB1-WT质粒组的荧光素酶活性(P<0.05).转染miR-129-5p模拟物可显著提高MG-63细胞中miR-129-5p的表达量(P<0.05),且可抑制MG-63细胞的增殖和迁移(P<0.05),同时降低HMGB1的表达水平;转染miR-129-5p抑制物后可显著降低Saos-2细胞中miR-129-5p的表达量(P<0.05),且可增强Saos-2细胞增殖和迁移能力(P<0.05),同时提高HMGB1表达水平.结论 miR-129-5p可能通过HMGB1基因抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移.
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