【摘 要】
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目的 观察肺癌组织miR-142-3p表达变化,探讨miR-142-3p靶向调控Rho相关结构域BTB蛋白质3(Rho-related BTB domain-containing protein 3,RHOBTB3)基因对肺癌A549细胞增殖能力的影响.方法 肺癌患者35例,均行手术治疗,取手术切除癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-142-3p及RHOBTB3 mRNA相对表达量.将对数生长期A549细胞分为miR-142-3p组和对照组,分别转染表达miR-142-3p的慢病毒和阴性
【机 构】
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郑州大学人民医院河南省人民医院胸外科,河南郑州 450003
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目的 观察肺癌组织miR-142-3p表达变化,探讨miR-142-3p靶向调控Rho相关结构域BTB蛋白质3(Rho-related BTB domain-containing protein 3,RHOBTB3)基因对肺癌A549细胞增殖能力的影响.方法 肺癌患者35例,均行手术治疗,取手术切除癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-142-3p及RHOBTB3 mRNA相对表达量.将对数生长期A549细胞分为miR-142-3p组和对照组,分别转染表达miR-142-3p的慢病毒和阴性对照慢病毒,转染48 h时采用实时荧光定量PCR法检测miR-142-3p相对表达量.筛选出稳定转染的miR-142-3p组A549细胞分为稳转miR-142-3p组和miR-142-3p+RHOBTB3组,稳定转染的对照组A549细胞分为稳转对照组和RHOBTB3组,miR-142-3p+RHOBTB3组、RHOBTB3组采用脂质体转染法转染表达RHOBTB3的质粒,稳转miR-142-3p组、稳转对照组不做处理.转染48 h,4组采用Western blot法检测RHOBTB3蛋白相对表达量,采用CCK-8法检测培养96 h时细胞增殖率,采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数目.采用荧光素酶报告基因实验验证miR-142-3p靶向结合RHOBTB3基因.结果 肺癌组织miR-142-3p相对表达量(0.58±0.27)低于癌旁组织(1.06±0.34)(t=-6.508,P＜0.001),RHOBTB3 mRNA 相对表达量(1.24±0.32)高于癌旁组织(0.51±0.29)(t=10.020,P＜0.001).miR-142-3p 组细胞 miR-142-3p 相对表达量(9.45±1.80)高于对照组(1.05±0.32)(t=11.240,P＜0.001).稳转miR-142-3p组RHOBTB3蛋白相对表达量(0.47±0.05)、细胞增殖率[(48.56±9.97)％]及细胞克隆形成数目[(47.00±8.39)个]均低于稳转对照组[0.79±0.07、(100.00±8.71)％、(165.67±13.92)个]和 miR-142-3p+RHOBTB3组[0.77±0.06,(95.82±9.79)％、(141.33±12.88)个](P＜0.05),RHOBTB3组 RHOBTB3蛋白相对表达量(1.20±0.12)、细胞增殖率[(153.23±18.29)％]及细胞克隆形成数目[(267.83±23.25)个]均高于miR-142-3p+RHOBTB3组(P＜0.05).荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-3p+pMIR WT组荧光素酶活性(0.41±0.05)低于 NC+pMIR WT 组(1.01±0.12)(t=11.220,P＜0.001),miR-142-3p+pMIR MUT 组荧光素酶活性(0.95±0.09)与NC+pMIR MUT组(1.02±0.09)比较差异无统计学意义(t=1.322,P=0.216).结论 肺癌组织miR-142-3p表达下调、RHOBTB3表达上调,miR-142-3p可靶向RHOBTB3基因抑制肺癌A549细胞增殖.
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