【摘 要】
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目的 制备纯化钙调蛋白突变体CaMD130G和CaMD96V的蛋白,为后续体外实验研究提供高浓度高纯度的突变体蛋白奠定基础.方法 采用基因重组将重组质粒pGEX-6P-3/GST-CaMD130G和pGEX-6P-3/GST-CaMD96V转化入大肠杆菌,在大肠杆菌中诱导表达相应的蛋白,再采用超声破碎法制备融合蛋白,并且采用Precission protease进行酶切,SDS-PAGE确认制备蛋白的浓度与纯度,Pull-down assay的方法检测蛋白的活性.结果 本研究制备了较高浓度与纯度的钙调蛋白
【机 构】
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中国医科大学药学院药物毒理学教研室,辽宁沈阳,110122;西南医科大学心血管医学研究所,医学电生理教育部重点实验室,四川泸州646000
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目的 制备纯化钙调蛋白突变体CaMD130G和CaMD96V的蛋白,为后续体外实验研究提供高浓度高纯度的突变体蛋白奠定基础.方法 采用基因重组将重组质粒pGEX-6P-3/GST-CaMD130G和pGEX-6P-3/GST-CaMD96V转化入大肠杆菌,在大肠杆菌中诱导表达相应的蛋白,再采用超声破碎法制备融合蛋白,并且采用Precission protease进行酶切,SDS-PAGE确认制备蛋白的浓度与纯度,Pull-down assay的方法检测蛋白的活性.结果 本研究制备了较高浓度与纯度的钙调蛋白突变体CaMD130G和CaMD96V蛋白,CaMD130G蛋白能浓度依赖性地与心肌钙通道蛋白片段CT1结合,而CaMD96V蛋白能浓度依赖性地与心肌钙通道蛋白片段pre-IQ结合,制备的CaMD130G和CaMD96V蛋白具有很好的活性.结论 基因重组、超声破碎的方法能制备高浓度、高纯度以及高活性的突变体CaMm0G和CaMD96V蛋白,为进一步研究奠定坚实的基础.
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