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摘要：为了摸索和解决红千层的播种繁殖技术，进行了播种育苗的试验工作。从几年来的实践看，如何选择和确定红千层种子的成熟期和播种日期是播种技术的关键所在。现简述于下:
关键词:红千层;组织培养;快速繁殖;材料保存
中图分类号：K928.73 文献标识码：A 文章编号：
红千层又名刷子树，原产澳大利亚，多年生常绿花灌木，耐寒热带树种，干形曲折古朴，小枝密集成丛，叶披针状，形如柳叶， 3-5年方凋落；花朵无柄，苞片极小，鲜红色的雄蕊花丝密集于嫩枝基部四周，形如洗瓶的刷子，十分美丽奇特，故而得名瓶刷树， 2000年被海南、上海、四川确定为最有推广前景的园林树种之一。
1 材料与方法
供试材料为四川农业大学林木遗传育种实验场盆栽红千层,选取生长健壮、洁净且无病虫害植株的当年生的直径为0.2~0.4 cm的半木质化枝条。将枝条在室内去除叶片,自来水冲洗数次。用1%的洗衣粉水浸泡10 min后用毛笔刷清洗外植体表面,再用流水冲洗30 min。在无菌条件下,用75%酒精消毒0.5 min,再用0.1%升汞(HgCl2)处理6~8min,无菌水冲洗5~6次后,切割成1~2 cm的带腋芽茎段作为接种外植体接种于启动培养基上,接种后先暗培养1周再转入光照培养。初代培养30 d后剪取诱导出的芽接种于继代培养基上,观察其增殖情况。把部分增殖后的丛生苗置于5e的冰箱中进行低温培养,160 d后观察其生长情况。将继代培养所获丛苗切割成4~7个芽一簇,在NAA浓度为0.01 mg/L的培养基上壮苗培养,20 d后接种于生根培养基上进行根诱导,30 d时统计生根情况。
启动培养、继代培养和壮苗培养以MS为基本培养基,生根诱导以1/2 MS为基本培养基。生长调节剂采用6-BA和NAA,每种培养基均加入0.7%的琼脂和3%的蔗糖(其中生根培养基为1.5%),pH 5.8~6.0。培养条件:培养室温度为(25 ±2) 摄氏度,光照强度1500~2000 lx,光照12 h/d。
2 结果与分析
2.1 外植体的萌动与生长
将外植体接种于启动培养基上培养,9 d后腋芽开始萌发,30 d后腋芽可生长到0.5~1 cm且叶色浓绿生长正常。不同浓度的6-BA对红千层启动率的影响结果见表1。从表1中可以看出6-BA浓度为2.0 mg/L时外植体的启动率明显的高于6-BA浓度为1.0 mg/L和3.0 mg/L,说明6-BA浓度为2.0 mg/L时有利于腋芽的诱导。
表1 6-BA浓度对红千层启动率的影响
注:启动率=启动外植体数/(接种外植数-污染外植体数)。
2.2 丛生芽的诱导与增殖
将在启动培养中诱导出的腋芽接种于增殖培养基上培养,12 d后外植体基部开始膨大,并逐渐产生愈伤组织。经两次继代培养后,愈伤组织便逐渐分化出小丛芽。将分化出的丛生芽切割成3~5个芽苗1簇,继续进行继代培养。切割后的丛芽生长、分化较快,40 d可继代1次,其结果见表2。
表2 不同BA浓度对丛生芽继代增殖的影响
从表2中可看出随着BA浓度的增加其增殖倍数随之增加,但其丛生芽的高生长却随之下降,说明高浓度的6-BA有利于愈伤组织的诱导与分化,同时对丛生苗的高生长有一定的抑制作用。结果表明:BA浓度为1.0 mg/L时较有利于愈伤组织的诱导与分化,而且丛生芽较多,高、径生长适中。
2.3 继代材料的保存
在一般培养温度条件下,继代培养40 d后其愈伤组织生长与分化便开始减缓,60 d后几乎停止,同时高、径生长较缓慢。超过80 d后部分分化出的小苗將逐渐枯黄死去,160 d后有2/3以上的丛生苗死去且愈伤组织基部培养基变黄。将经过继代培养后的丛生苗在5摄氏度的冰箱中进行冷藏保存培养160 d后丛生苗无生长不良反应,再将丛生苗切割进行继代培养,其生长与分化与一般培养条件下直接进行继代培养相比无显著差异。
2.4 壮苗培养与不定根的诱导
继代培养所获芽苗矮小、纤弱不能直接进行生根诱导,因此将其切割后进行壮苗培养。20 d后芽苗可长到1.5~2.5 cm长,径能明显增粗。然后将壮苗培养所获生长健壮的无根单苗,接种到生根培养基上进行生根诱导,8 d后芽苗下切口处微有膨大,12 d后膨大的愈伤组织表面有白色突起,分化出根的生长点,15 d后长成白色小根。1个月后其结果见表3。
从表3中可以看出,当NAA浓度为0时,无根单苗生根整齐、均匀且根的质量较好。
2.5 试管苗的移栽
将经生根诱导所获的生根瓶苗在室温散射光下培养3 d,打开封口膜于温室大棚预培养2 d,洗去根部培养基,移栽到珍珠岩B蛭石=1:1的育苗基质中或栽植于营养袋中。保持85%左右的湿度10 d,30d后成活率可达85.7%。
表3 NAA浓度对生根诱导的影响
3 结论与讨论
本试验采用红千层的带腋芽茎段为外植体诱导愈伤组织分化出丛生苗,启动培养9 d后侧芽开始萌动,30 d后腋芽可生长到0.5~1 cm;继代培养中切割后的芽苗生长、分化迅速,40 d可继代1次,其增殖倍数可达30~50倍,经壮苗培养后芽苗生长健壮、高度适中;生根培养中,出根快、整齐、生根率高,根系发育良好。生根苗移栽成活率高,生长正常。符合组培快繁的要求。在一般培养条件下继代培养可推迟到80 d左右进行。但如果需再次推迟继代培养的,可将经过继代培养的丛生苗在5摄氏度的冰箱中进行冷藏保存培养,这样可将继代培养推迟160 d进行。经过继代培养后的丛生苗在5摄氏度的培养条件下保存,其保存时间能否再延长有待于进一步的观察和研究。
关键词:红千层;组织培养;快速繁殖;材料保存
中图分类号：K928.73 文献标识码：A 文章编号：
红千层又名刷子树，原产澳大利亚，多年生常绿花灌木，耐寒热带树种，干形曲折古朴，小枝密集成丛，叶披针状，形如柳叶， 3-5年方凋落；花朵无柄，苞片极小，鲜红色的雄蕊花丝密集于嫩枝基部四周，形如洗瓶的刷子，十分美丽奇特，故而得名瓶刷树， 2000年被海南、上海、四川确定为最有推广前景的园林树种之一。
1 材料与方法
供试材料为四川农业大学林木遗传育种实验场盆栽红千层,选取生长健壮、洁净且无病虫害植株的当年生的直径为0.2~0.4 cm的半木质化枝条。将枝条在室内去除叶片,自来水冲洗数次。用1%的洗衣粉水浸泡10 min后用毛笔刷清洗外植体表面,再用流水冲洗30 min。在无菌条件下,用75%酒精消毒0.5 min,再用0.1%升汞(HgCl2)处理6~8min,无菌水冲洗5~6次后,切割成1~2 cm的带腋芽茎段作为接种外植体接种于启动培养基上,接种后先暗培养1周再转入光照培养。初代培养30 d后剪取诱导出的芽接种于继代培养基上,观察其增殖情况。把部分增殖后的丛生苗置于5e的冰箱中进行低温培养,160 d后观察其生长情况。将继代培养所获丛苗切割成4~7个芽一簇,在NAA浓度为0.01 mg/L的培养基上壮苗培养,20 d后接种于生根培养基上进行根诱导,30 d时统计生根情况。
启动培养、继代培养和壮苗培养以MS为基本培养基,生根诱导以1/2 MS为基本培养基。生长调节剂采用6-BA和NAA,每种培养基均加入0.7%的琼脂和3%的蔗糖(其中生根培养基为1.5%),pH 5.8~6.0。培养条件:培养室温度为(25 ±2) 摄氏度,光照强度1500~2000 lx,光照12 h/d。
2 结果与分析
2.1 外植体的萌动与生长
将外植体接种于启动培养基上培养,9 d后腋芽开始萌发,30 d后腋芽可生长到0.5~1 cm且叶色浓绿生长正常。不同浓度的6-BA对红千层启动率的影响结果见表1。从表1中可以看出6-BA浓度为2.0 mg/L时外植体的启动率明显的高于6-BA浓度为1.0 mg/L和3.0 mg/L,说明6-BA浓度为2.0 mg/L时有利于腋芽的诱导。
表1 6-BA浓度对红千层启动率的影响
注:启动率=启动外植体数/(接种外植数-污染外植体数)。
2.2 丛生芽的诱导与增殖
将在启动培养中诱导出的腋芽接种于增殖培养基上培养,12 d后外植体基部开始膨大,并逐渐产生愈伤组织。经两次继代培养后,愈伤组织便逐渐分化出小丛芽。将分化出的丛生芽切割成3~5个芽苗1簇,继续进行继代培养。切割后的丛芽生长、分化较快,40 d可继代1次,其结果见表2。
表2 不同BA浓度对丛生芽继代增殖的影响
从表2中可看出随着BA浓度的增加其增殖倍数随之增加,但其丛生芽的高生长却随之下降,说明高浓度的6-BA有利于愈伤组织的诱导与分化,同时对丛生苗的高生长有一定的抑制作用。结果表明:BA浓度为1.0 mg/L时较有利于愈伤组织的诱导与分化,而且丛生芽较多,高、径生长适中。
2.3 继代材料的保存
在一般培养温度条件下,继代培养40 d后其愈伤组织生长与分化便开始减缓,60 d后几乎停止,同时高、径生长较缓慢。超过80 d后部分分化出的小苗將逐渐枯黄死去,160 d后有2/3以上的丛生苗死去且愈伤组织基部培养基变黄。将经过继代培养后的丛生苗在5摄氏度的冰箱中进行冷藏保存培养160 d后丛生苗无生长不良反应,再将丛生苗切割进行继代培养,其生长与分化与一般培养条件下直接进行继代培养相比无显著差异。
2.4 壮苗培养与不定根的诱导
继代培养所获芽苗矮小、纤弱不能直接进行生根诱导,因此将其切割后进行壮苗培养。20 d后芽苗可长到1.5~2.5 cm长,径能明显增粗。然后将壮苗培养所获生长健壮的无根单苗,接种到生根培养基上进行生根诱导,8 d后芽苗下切口处微有膨大,12 d后膨大的愈伤组织表面有白色突起,分化出根的生长点,15 d后长成白色小根。1个月后其结果见表3。
从表3中可以看出,当NAA浓度为0时,无根单苗生根整齐、均匀且根的质量较好。
2.5 试管苗的移栽
将经生根诱导所获的生根瓶苗在室温散射光下培养3 d,打开封口膜于温室大棚预培养2 d,洗去根部培养基,移栽到珍珠岩B蛭石=1:1的育苗基质中或栽植于营养袋中。保持85%左右的湿度10 d,30d后成活率可达85.7%。
表3 NAA浓度对生根诱导的影响
3 结论与讨论
本试验采用红千层的带腋芽茎段为外植体诱导愈伤组织分化出丛生苗,启动培养9 d后侧芽开始萌动,30 d后腋芽可生长到0.5~1 cm;继代培养中切割后的芽苗生长、分化迅速,40 d可继代1次,其增殖倍数可达30~50倍,经壮苗培养后芽苗生长健壮、高度适中;生根培养中,出根快、整齐、生根率高,根系发育良好。生根苗移栽成活率高,生长正常。符合组培快繁的要求。在一般培养条件下继代培养可推迟到80 d左右进行。但如果需再次推迟继代培养的,可将经过继代培养的丛生苗在5摄氏度的冰箱中进行冷藏保存培养,这样可将继代培养推迟160 d进行。经过继代培养后的丛生苗在5摄氏度的培养条件下保存,其保存时间能否再延长有待于进一步的观察和研究。