【摘 要】
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目的:研究微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-7-5p靶向调控Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响,及可能的作用机制.方法:收集食管癌及
【机 构】
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川北医学院附属医院胸心外科,四川南充637000;仪陇县新政镇社区医院保健科,四川南充 637641
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目的:研究微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-7-5p靶向调控Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响,及可能的作用机制.方法:收集食管癌及其配对癌旁组织40例,采用实时荧光定量PCR法检测食管癌及其配对的癌旁组织中miR-7-5p和KLF4 mRNA的表达水平.对食管癌组织中miR-7-5p与KLF4表达水平进行相关性分析.Targetscan 7.1预测软件及双荧光素酶报告系统验证miR-7-5p对KLF4基因的靶向调控作用.实时荧光定量PCR法检测miR-7-5p和KLF4 mRNA在食管癌细胞TE1、Eca109、EC9706和人食管鳞状上皮细胞Het-1中的表达水平.选择miR-7-5p低表达的食管癌TE1细胞,采用脂质体法分别将miR-7-5p-模拟物(miR-7-5p-mimics)或 miR-7-5p-mimics 联合携带有KLF4全基因的重组载体[过表达 KLF4(over-expression-KLF4,OE-KLF4)]共转入TE1细胞,以转入无相关性的阴性对照-模拟物(negative control-mimics,NC-mimics)作为对照组.MTS法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测各组细胞的迁移能力.蛋白质印迹法检测各组细胞中Wnt3a和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平.结果:miR-7-5p在食管癌组织中表达下调(P=0.043),KLF4 mRNA在食管癌组织中表达上调(P=0.000),且两者在食管癌组织中表达呈负相关性(r=-0.601,P=0.024).Targetscan 7.1预测软件及双荧光素酶报道基因报告系统验证提示,表明KLF4是miR-7-5p的靶基因.与NC-mimics 组相比,miR-7-5p-mimics 组和 miR-7-5p-mimics+OE-KLF4组TE1细胞的增殖和迁移能力降低(P值均＜0.05),但上调KLF4表达水平能减弱miR-7-5p对TE1细胞增殖和迁移能力的抑制作用(P值均＜0.05).与 NC-mimics 组相比,miR-7-5p-mimics 组和 miR-7-5p-mimics+OE-KLF4组TE1细胞中Wnt3a和β-catenin表达明显下调(PP值均＜0.05),但上调KLF4表达能减弱miR-7-5p对Wnt3a和β-catenin表达的抑制作用(P值均＜0.05).结论:KLF4为miR-7-5p的靶基因,miR-7-5p通过靶向调控KLF4及其下游Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌细胞的增殖和迁移.
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