【摘 要】
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目的: 在大肠杆菌表达人lrg,制备鉴定人Lrg免疫血清. 方法: 构建pcTAT-lrg重组表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白;对表达的融合蛋白采用镍柱和SDS-PAGE纯化;以
【机 构】
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第四军医大学基础部生物化学和分子生物学教研室,陕西,西安,710033
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目的: 在大肠杆菌表达人lrg,制备鉴定人Lrg免疫血清. 方法: 构建pcTAT-lrg重组表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白;对表达的融合蛋白采用镍柱和SDS-PAGE纯化;以纯化蛋白作为免疫抗原,对新西兰白兔实施多次免疫(间隔时间分别为1 mo, 3 wk, 2 wk). 结果: 获得兔抗人Lrg免疫血清. 经过ELISA和Western Blot检测,效价在1∶1000以上. 真核细胞实验表明,6His-TAT-Lrg蛋白具有良好的穿透性,可以在30 min内从培养液进入细胞质; 免疫组化实验表明Lrg是一种胞质蛋白; 兔抗人Lrg免疫血清可有效应用于细胞和组织的检测. 结论: 制备得到兔抗人Lrg免疫血清,为lrg的功能研究打下基础.
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