【摘 要】
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目的 探究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）在乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中的表达，并初步探究其对TAMs极化的调控和功能影响。方法 收集30例自2019年10月至2021年1月于海口市妇幼保健院确诊的乳腺癌患者肿瘤组织样本，葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离乳腺癌组织中的TAMs（TAMs组）,同时以健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）做为对照（PBMC组）,RT
【基金项目】
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海南省卫生健康行业科研项目（21A200035）；
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目的 探究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）在乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中的表达，并初步探究其对TAMs极化的调控和功能影响。方法 收集30例自2019年10月至2021年1月于海口市妇幼保健院确诊的乳腺癌患者肿瘤组织样本，葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离乳腺癌组织中的TAMs（TAMs组）,同时以健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）做为对照（PBMC组）,RT-PCR检测两组巨噬细胞中M2型标记分子精氨酸-1（Arg-1）、CD206和CD163与M1型标记分子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和人类白细胞抗原DR（HLA-DR）的mRNA表达水平。使用LPS和IFN-γ诱导人单核细胞系THP-1和小鼠巨噬细胞Raw264.7分化为M1型，IL-4进行M2型诱导分化。RT-PCR检测lncRNA NEAT1在诱导后M1、M2型巨噬细胞中的表达；在Raw264.7细胞中转染沉默lncRNA NEAT1表达和阴性对照慢病毒（LV-shNEAT1与LV-NC）,并使用Transwell共培养体系将转染后的Raw264.7与乳腺癌细胞MCF-7进行共培养，并将共培养体系分为3组：control组、LV-NC组（转染LV-NC）与LV-shNEAT1组（转染LV-shNEAT1）。RT-PCR检测共培养体系中Raw264.7细胞中M1型巨噬细胞标记分子TNF-α、HLA-DR和M2型巨噬细胞标记分子Arg-1、CD206及CD163的表达。使用EdU染色检测各培养体系中MCF-7细胞的增殖；Western blot实验检测各培养体系中MCF-7细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达；Transwell侵袭实验检测各培养体系中MCF-7细胞的侵袭能力。以雌性BALB/c裸鼠为研究对象，并将其分为3组：control组（注射含MCF-7细胞的PBS悬液）,LV-NC组（联合注射感染LV-shNC的Raw264.7与MCF-7细胞）,LV-shNEAT1组（联合注射感染LV-shNEAT1的Raw264.7细胞与MCF-7细胞）,取各组裸鼠的移植瘤组织，HE染色观察肿瘤细胞的生长，免疫组织化学染色观察肿瘤组织区增殖指标Ki-67的表达。结果 与PBMC组相比，乳腺癌TAMs组中以M2型巨噬细胞为主，且lncRNA NEAT1表达明显升高（P＜0.05）。体外诱导人源与小鼠源性巨噬细胞分化的结果显示，与M1型巨噬细胞相比，M2型中lncRNA NEAT1的表达显著增加（P＜0.05）。与control组相比，LV-NC组和LV-shNEAT1组共培养体系中Raw264.7细胞中Arg-1、CD206及CD163的表达水平均显著升高（P＜0.05）,而TNF-α、HLA-DR表达水平却明显降低（P＜0.05）,同时LV-NC组和LV-shNEAT1组共培养体系中MCF-7细胞的增殖活性与侵袭能力增强（P＜0.05）,E-cadherin表达降低，N-cadherin、Vimentin和Snail的表达升高（P＜0.05）。与LV-NC组相比，LV-shNEAT1组共培养体系中Raw264.7细胞中Arg-1、CD206及CD163的表达水平均明显降低（P＜0.05）,TNF-α、HLA-DR表达水平显著升高（P＜0.05）,而共培养体系中的MCF-7细胞的增殖活性和侵袭能力减弱（P＜0.05）,E-cadherin表达升高，N-cadherin、Vimentin和Snail的表达降低（P＜0.05）。裸鼠皮下移植瘤实验结果表明，与control组相比，LV-NC组与LV-shNEAT1组MCF-7细胞的成瘤能力和移植瘤组织中Ki-67的阳性表达率均明显增强（P＜0.05）;而与LV-NC组相比，LV-shNEAT1组MCF-7细胞的成瘤能力和Ki-67的阳性表达率均明显降低（P＜0.05）。结论 lncRNA NEAT1在乳腺癌TAMs的表达水平明显升高，而沉默其表达可能通过抑制TAMs的M2极化抑制体内外乳腺细胞的增殖与侵袭能力。
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