【摘 要】
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目的构建结核分枝杆菌(MTB)Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化。方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板，采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段，构建原核表达载体pET26b-Rv0073，经测序确定无误后转化至大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21中。用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)方法检测重组蛋白表达，检测异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导不同时间、不同
【机 构】
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150081 哈尔滨医科大学医学微生物学教研室，黑龙江省感染与免疫重点实验室，黑龙江省感染与免疫创新团队，黑龙江省普通高校病原学重点实验室,150081 哈尔滨医科大学医学微生物学教研室，黑龙江省感染
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目的构建结核分枝杆菌(MTB)Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化。
方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板，采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段，构建原核表达载体pET26b-Rv0073，经测序确定无误后转化至大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21中。用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)方法检测重组蛋白表达，检测异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导不同时间、不同温度条件下重组蛋白表达量。采用His镍磁珠进行外源蛋白小量纯化。
结果成功构建重组表达质粒，重组蛋白经IPTG诱导后，2 h开始明显表达且表达量无时间依赖性，在不同温度诱导下，重组蛋白的表达量随温度的增高而减少。重组蛋白以包涵体形式存在，经His镍磁珠纯化后获得重组蛋白。
结论成功构建并表达Rv0073蛋白，为后续Rv0073的大量纯化及其功能研究奠定了基础。
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