辣椒素类物质是辣椒属植物特有的一种次生代谢产物，特异地在辣椒果实胎座中合成，且具有明显的发育阶段特异性。辣椒素合成途径相关基因主要在辣椒花后16 d胎座至绿熟期转录，然而转录调控的精细分子机制尚不太清楚。用已知参与调控辣椒素生物合成的转录因子为诱饵，采用酵母双杂交技术从辣椒素合成阶段酵母cDNA文库中筛选与其互作的蛋白有利于明确辣椒素生物合成的转录调控机制，因此，获得辣椒素合成阶段的高质量酵母cDNA文库是关键。本研究采用辣椒“59”自交系花后16 d （DPA）的RNA作为模板，之后用SMART cDNA/均一化cDNA文库技术（Switching Mechanism At 5’ end of the RNA Transcript）与同源重组的方法将“59”自交系的胎座cDNA文库转化酵母感受态Y187。通过对收集的文库进行鉴定发现，达到3.63×10⁷ CFU/mL，插入片段大约250～2 000 bp，文库满足酵母双杂交要求。辣椒胎座高质量cDNA文库的构建为后续辣椒素生物合成的转录调控网络研究提供了基础。