miR-194-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的作用

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目的

研究miR-194-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响。

方法

通过基因芯片方法,筛查出8份人瘢痕疙瘩与正常组织中差异性表达的miRNA。选取下调表达明显的miR-194-3p进行研究,通过miRDB预测其与RUNX2结合作用,并在人瘢痕疙瘩成纤维细胞(human keloid fibroblasts, HKFs)及第3代瘢痕疙瘩细胞中,分别通过荧光报告基因验证miR-194-3p与RUNX2间的作用。在2种细胞中分别通过Transwell实验检测miR-194-3p对成纤维细胞迁移的作用。Western blot及real-time PCR分析HKFs细胞中miR-194-3p对RUNX2及迁移相关蛋白金属基质蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2, MMP2)的作用。采用SPSS 19.0软件对结果进行统计学分析,使用非配对t检验对各组进行比较,P<0.05为差异具有统计学意义。

结果

miR-721、miR-21-3p、miR-382-3p、miR-194-3p、miR-3107-5p和miR-144-5p在瘢痕疙瘩中存在异常表达的现象;miRDB软件分析显示,miR-194-3p与RUNX2存在靶向结合位点;报告基因实验证明,与对照组相比miR-194-3p能够抑制约50%的RUNX2活性(t=2.7764,P=0.0005)。基因和蛋白水平实验发现,miR-194-3p能够显著抑制RUNX2及MMP2的表达,进而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移(t=2.7764,P<0.05)。

结论

瘢痕疙瘩中miR-194-3p可能通过抑制RUNX2的活性来抑制成纤维细胞的迁移。

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