【摘 要】
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目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-I)沉默对3T3-L1前脂肪细胞分化关键分子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA及蛋白表达的影响,并观
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科,武汉,430030
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目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-I)沉默对3T3-L1前脂肪细胞分化关键分子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA及蛋白表达的影响,并观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞能力的改变,探讨胰岛素受体底物(IRSs)是否作为C/EBPα 、PPAR-γ的上游调节信号在前脂肪细胞分化中起到重要的调节作用.方法 合成4条IRS-I shRNA,Western blotting筛选出沉默效率最高的1条.3T3-L1前脂肪细胞分为IRS-1沉默组和对照组.IRS-1沉默组细胞用沉默效率最高的IRS-1 shRNA质粒转染3T3-LI前脂肪细胞,沉默细胞中的IRS-1分子；对照组采用无意义IRS-1 shRNA质粒转染3T3-L1前脂肪细胞.转染24h后诱导其分化成熟,分化72 h后检测促进前脂肪细胞分化的关键分子C/EBPα、PPARγ的表达.继续诱导分化至第7天,油红O染色观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的比例,检测其分化能力的改变.结果 与对照组相比,IRS-1沉默组在诱导分化72 h后,Real-time PCR结果显示3T3-L1前脂肪细胞中C/EBPα mRNA、PPARγ mRNA表达明显下降(Pa＜0.05),Western blotting结果显示C/EBPα、PPARγ蛋白水平也同样显著下降(Pa＜0.05)；细胞继续分化至第7天,油红O染色显示,IRS-1沉默组前脂肪细胞分化成熟的比例与对照组比较显著降低.结论 胰岛素可能通过IRS-1刺激C/EBPα、PPARγ的表达促进前脂肪组织的分化.
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