【摘 要】
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磷酸烯醇丙酮酸合成酶(PpsA)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PckA)是糖代谢中心途径中生成磷酸烯醇丙酮酸(PEP)的2个关键酶,在大肠杆菌中分别由ppsA和pckA基因编码.首先用PCR方法从
【机 构】
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复旦大学生命科学学院,上海,200433
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磷酸烯醇丙酮酸合成酶(PpsA)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PckA)是糖代谢中心途径中生成磷酸烯醇丙酮酸(PEP)的2个关键酶,在大肠杆菌中分别由ppsA和pckA基因编码.首先用PCR方法从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增得到了ppsA和pckA基因,并将ppsA,pckA以单独或串联的方式克隆到大肠杆菌表达质粒p pr上.构建成的质粒ppr-ppsA,ppr-pckA和ppPR-ppsA-pckA导人E coli P2392菌株中表达.结果表明,ppsA,pckA基因的单独表达使宿主细胞的PpsA和PckA酶活力分别提高到5 2和2.5倍;串联表达使宿主细胞PpsA和PckA酶活力分别提高到3.1和2.3倍,还使得以PEP为底物合成的3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸(DAHP)产量提高到2.1倍.2个基因串联表达比单个基因表达更有利于提高DAHP的产量。
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